HIV-1 Tat蛋白對HSV-2激活KSHV裂解性周期復制的影響.pdf

1、卡波濟肉瘤(Kaposi’s sarcoma，KS)是獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)患者晚期發(fā)生率最高的惡，陛腫瘤。既往研究證實，其病原卡波濟肉瘤相關(guān)皰疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus，KSHV)不能獨立引發(fā)KS，還需要協(xié)同因子的參與。然而促使KSHV引發(fā)KS的因素目前還未完全清楚。已經(jīng)證明，人類單純皰疹病毒1型

2、(herpes simplex virus 1，HSV-1)、人巨細胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)，人類皰疹病毒6型(human herpesvirus 6，HHV-6)和人類免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1，HIV-1)反式激活蛋白(transactivative transcription protein，Tat)是激活KSHV裂解性周期復制的重

3、要協(xié)同因子。鑒于HIV-1血清陽性人群中人類單純皰疹病毒2型(human herpes simplex vires-2，HSV-2)陽性率遠高于HIV-1陰性人群，HSV-2與HIV-1之間密切相關(guān)，本研究我們進一步探討了HSV-2影響KSHV復制的潛能以及HIV-1 Tat對該過程的影響。 實驗首先將HSV-2標準株333感染原發(fā)性滲出性淋巴瘤[primary effusion lymphoma，PEL，又稱體腔滲出性淋巴瘤(

4、bodycavity-based lymphoma，BCBL)】來源的BCBL-1細胞，Western blot結(jié)果顯示，HSV-2感染BCBL-1細胞72h后HSV-2型特異性糖蛋白G-2(glycoprotein G-2，gG-2)開始穩(wěn)定表達。實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(Real-time quantitative polymerase chain reaction，Real-time PCR)檢測結(jié)果表明，HSV-2感染可以誘導

5、KSHV ORF50(KSHV周期復制的開關(guān)基因)、ORF26(編碼KSHV次要衣殼蛋白)和ORF29(編碼KSHV包裝相關(guān)蛋白)mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高。與對照組比較，HSV-2感染組3、6、12、24、48、72和96h ORF50 mRNA水平分別升高了9.92、2.55、227、31.6、6.6、75和3.02倍(P<0.05)。類似地，ORF26 mRNA表達水平在3～96h也呈現(xiàn)不同程度的升高，而ORF29 mRNA表達水平的升

6、高集中在48～96h。免疫熒光測定(immunofluorescence assay，IFA)結(jié)果顯示，HSV-2感染BCBL-1同時還可誘導KSHV裂解周期蛋白的表達。蟲熒光素酶報告實驗驗證了HSV-2對ORF50啟動子的直接激活作用。進一步將HIV-1 Tat質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HSV-2感染的BCBL-1細胞，采用Real-time PCR和Western blot分別檢測KSHV ORF26 mRNA轉(zhuǎn)錄和病毒白細胞介素6(Viral In

7、terleukin-6，vIL-6)的表達。與單純HSV-2感染比較，KSHV ORF26 mRNA轉(zhuǎn)錄水平在6、24、48和72h分別升高了3.92、1.67、2.74和1.82倍(P<0.05)，vlL-6表達水平在6-72h同樣有不同程度的升高。蟲熒光素酶報告實驗顯示，Tat可以增強HSV-2激活KSHV ORF50啟動子活性。以上結(jié)果提示，HSV-2可能通過誘導KSHV復制來提高病毒載量從而參與KS的致病過程；HIV-1 Tat