抗HIV-1 Tat蛋白單克隆抗體的制備、鑒定及初步應(yīng)用.pdf

1、艾滋病（AIDS）是由人免疫缺陷病毒（HIV）感染引起的一種獲得性免疫缺陷綜合征。目前HIV常規(guī)的檢測(cè)方法分為篩查試驗(yàn)和確認(rèn)試驗(yàn)，最常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），另外還有一些快速檢測(cè)方法。確認(rèn)試驗(yàn)包括免疫印跡試驗(yàn)（WB）、條帶免疫試驗(yàn)（LIATEKHIVⅢ）、放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）及免疫熒光試驗(yàn)（IFA），目前國(guó)內(nèi)常用的確認(rèn)試驗(yàn)是WB。這些檢測(cè)方法的敏感性及特異性都比較好，但由于均是檢測(cè)HIV抗體，對(duì)于一些已經(jīng)感

2、染HIV，但仍不能檢測(cè)到抗體（即“窗口期”）的樣本，可能存在漏檢，需要用檢測(cè)抗原或者核酸的方法作為輔助試驗(yàn)。常用的HIV抗原檢測(cè)為P24抗原檢測(cè)，但P24抗原在機(jī)體感染HIV不同時(shí)期存在很大的波動(dòng)性，因而存在漏檢的可能性，而PCR檢測(cè)HIV核酸的方法又存在假陽(yáng)性高、操作復(fù)雜等問(wèn)題。因此，以在HIV感染早期出現(xiàn)、含量較為穩(wěn)定、檢測(cè)便捷的抗原作為HIV新的抗原檢測(cè)的靶點(diǎn)，建立新的抗原檢測(cè)方法，可作為HIV-1抗體不確定或窗口期感染者的輔助診

3、斷方法。轉(zhuǎn)錄激活蛋白（Tat蛋白）屬于調(diào)控蛋白，為HIV-1的反式激活因子。Tat為HIV最早表達(dá)的蛋白質(zhì)之一，因此將檢測(cè)Tat蛋白作為HIV感染窗口期及早期檢測(cè)的輔助手段，受到了人們的關(guān)注。
　　本研究擬制備Tat蛋白的單克隆抗體（mAb），以建立新的HIV抗原檢測(cè)的方法。實(shí)驗(yàn)首先以Tat蛋白免疫BALB/c小鼠，采用雜交瘤技術(shù)制備并獲得了針對(duì)Tat蛋白的3株mAb，分別命名為A10、E2、C10。采用間接ELISA法進(jìn)一步鑒定

4、了mAb的特異性：將上述3株mAb分別與Tat蛋白、gp41-5多肽及Bcsp31蛋白進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果3株mAb均與Tat蛋白發(fā)生反應(yīng)，與gp41-5多肽和Bcsp31蛋白均不反應(yīng)，表明我們制備的mAb具有較高的特異性；將這3株mAb作相對(duì)親和力的比較，其高低依次為C10>E2>A10；位點(diǎn)相加競(jìng)爭(zhēng)ELISA法分析其抗原表位，發(fā)現(xiàn)本研究所獲得的3株mAb中，A10與E2、C10針對(duì)的抗原表位有差異，E2與C10針對(duì)不同的抗原表位。

5、　　在此基礎(chǔ)上，選取mAbA10為包被抗體，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的C10作為酶標(biāo)抗體建立了雙抗體夾心ELISA法。采用該方法檢測(cè)20份HIV-1抗體陽(yáng)性感染者血清中的Tat蛋白，結(jié)果共檢出6份，檢出率為30％。
　　本研究制備了針對(duì)Tat蛋白的mAb，對(duì)其特異性、相對(duì)親和力等進(jìn)行了研究，初步建立起以此mAb為基礎(chǔ)的、新的HIV抗原檢測(cè)方法，并將其應(yīng)用于樣本檢測(cè)，取得了初步的結(jié)果。此外，本mAb的制備，還可能為以Tat蛋白為