靶向糖基轉(zhuǎn)移酶shRNA表達質(zhì)粒對LoVo細胞轉(zhuǎn)移和增殖能力的抑制作用.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文靶向糖基轉(zhuǎn)移酶shRNA表達質(zhì)粒對LoVo細胞轉(zhuǎn)移和增殖能力的抑制作用姓名：賀富麗申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：張健20090320中文摘要面的研究，因此在本研究中，我們首次采用RNA干擾技術(shù)抑制GnTV的表達，構(gòu)建了針對結(jié)直腸癌中高表達基因QlTV的shRNA表達質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移潛能的人結(jié)直腸癌Lovo細胞，觀察GnTV的表達變化對LoVo細胞體外及體內(nèi)增殖及轉(zhuǎn)移能力的影響，為結(jié)直腸癌分子靶向治療

2、研究中新靶標的確定提供客觀依據(jù)。二、研究目的構(gòu)建針對結(jié)直腸癌中高表達基因GnTV的shRNA表達質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移潛能的人結(jié)直腸癌LoVo細胞，觀察GnTV的表達變化對LoVo細胞體外及體內(nèi)增殖及轉(zhuǎn)移能力的影響，為結(jié)直腸癌分子靶向治療研究中新靶標的確定提供客觀依據(jù)。三、實驗方法1、pGPU6／GFP／NeoGnTVshRNA質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定(1)Q1TVsiRNA序列的設(shè)計：按照siRNA設(shè)計原則，利用Ambion公司提供的“siRN

3、ATargetFinderandDesignTools“，根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中GnTV基因(NM0024103)cDNA，設(shè)計針對GnTVcDNA的RNA片段，序列分別如下：sense5’GGAAGTGCATGCAACTGTI’TA3’，sense57CTCCTTTGACCCT從GAAT3’。分別命名為GnTV／1564和GnTV／2224。將其中一對的序列打亂排列，經(jīng)Blast比對，無任何同源性超過70％的序列，作為陰性對照干擾序列，

4、序列如下：sense5’GTTCTCC(b氣ACGTGTCACGT3’，命名為G11，rV／NC。、(2)shRNA轉(zhuǎn)錄模板DNA的設(shè)計：根據(jù)前面設(shè)計的siRNA序列，設(shè)計模板DNA鏈，其順序分別為BbsI酶切位點、正義序列、9ntloop連接序列、反義序列、RNA聚合酶IⅡ終止子(6個T)、BamHI酶切位點。(3)質(zhì)粒pGPU6／GFP／NeoGIlTV的構(gòu)建及鑒定：先將各組2條模板單鏈退火處理，再與雙酶切后的pGPU6／GFP／N