苯并芘肺內(nèi)注射誘發(fā)大鼠肺腫瘤及綠茶的預(yù)防作用機(jī)制初步研究.pdf

1、目的：肺癌的發(fā)病率在工業(yè)化國家里持續(xù)居高不下，發(fā)展中國家的肺癌發(fā)病率仍在不斷上升。因而人們轉(zhuǎn)而注重肺癌的預(yù)防，希望通過化學(xué)預(yù)防策略降低肺癌的發(fā)病率。最佳的化學(xué)預(yù)防策略是通過日常飲食降低肺癌的發(fā)病風(fēng)險。茶為全球最普遍的飲料之一，年消費(fèi)量僅次于水，其中綠茶的防癌作用較好，有可能是最佳的肺癌預(yù)防飲料。但目前綠茶與肺癌的關(guān)系仍存在一定的爭議，綠茶預(yù)防肺癌的機(jī)制尚未完全明確。另外，肺腫瘤動物模型是評價肺癌防治方案必不可少的工具，而目前所采用的肺癌

2、裸鼠移植瘤模型以及采用致癌劑吸入、支氣管內(nèi)灌注、腹腔注射等方法構(gòu)建的原發(fā)性肺腫瘤模型等均存在不同程度的不足。因此，本課題試以苯并芘油劑經(jīng)皮穿刺肺內(nèi)注射的方法建立大鼠肺腫瘤動物模型，并以此模型評價綠茶對肺癌的預(yù)防作用，在此基礎(chǔ)上觀察綠茶對大鼠肺腫瘤組織以及對苯并芘所致大鼠肺損傷的p53和Bcl-2基因表達(dá)的影響，以初步闡明綠茶預(yù)防肺癌的機(jī)制。 方法：每次以含3，4-苯并芘2mg的苯并芘．玉米油混合劑0.2mL經(jīng)皮肺穿刺注射于經(jīng)戊巴

3、比妥鈉麻醉后的SD大鼠右肺，每2周處理1次，共4次。并以純玉米油肺內(nèi)注射4次作為陰性對照，苯并芘-玉米油皮下注射處理2次作為陽性對照。觀察大鼠腫瘤的發(fā)生情況。在綠茶預(yù)防肺腫瘤的實(shí)驗(yàn)中，以3，4-苯并芘油劑經(jīng)皮穿刺肺內(nèi)注射構(gòu)建大鼠原發(fā)性肺腫瘤模型，并以1％的綠茶作為大鼠的唯一飲料干預(yù)處理，對照組以水為唯一飲料，觀察綠茶處理對大鼠成瘤率的影響，并以原位雜交和免疫組織化學(xué)方法檢測綠茶對大鼠肺腫瘤組織p53和Bcl-2基因表達(dá)的影響。在此基礎(chǔ)上

4、，進(jìn)一步采用原位雜交和免疫組織化學(xué)方法觀察綠茶干預(yù)處理對肺內(nèi)注射3，4-苯并芘油劑后第1周、第4周、第8周及第16周大鼠肺組織p53和Bcl-2基因表達(dá)的影響。 結(jié)果：所有接受玉米油肺內(nèi)注射的大鼠一年內(nèi)均未發(fā)生腫瘤；皮下注射組局部惡性腫瘤發(fā)生率達(dá)100％，平均晚期腫瘤摘除時間為15.83周，中位時間為16周；苯并芘-玉米油肺內(nèi)注射組大鼠一年內(nèi)肺部惡性腫瘤發(fā)生率為70％左右，平均晚期腫瘤摘除時間為31.54周，中位時間為30周，苯

5、并芘肺內(nèi)注射較皮下注射更難以形成腫瘤。1％的綠茶使大鼠肺惡性腫瘤發(fā)生率下降為30％，綠茶干預(yù)組大鼠肺腫瘤組織p53表達(dá)上調(diào)、Bcl-2基因表達(dá)下調(diào)，且與對照組比較Bcl-2基因表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肺內(nèi)注射3,4-苯并芘油劑后第1周、第4周、第8周及第16周大鼠肺、支氣管上皮細(xì)胞、粘膜下層細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及肺間質(zhì)細(xì)胞等組織p53和Bcl-2基因均呈過量表達(dá)，但綠茶對苯并芘處理后大鼠各個時期肺組織的p53和B