竹節(jié)參總皂苷對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠的腦保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、　　目的：通過皮下注射D-半乳糖(D-gal)建立大鼠衰老模型,研究竹節(jié)參總皂苷對(duì)衰老大鼠的腦保護(hù)作用,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：將 Wistar 大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、竹節(jié)參總皂苷低、中、高劑量組和維生素E陽性對(duì)照組,采用D-半乳糖致衰老大鼠模型。模型組及給藥組皮下注射D-半乳糖400mg/kg,正常組皮下注射生理鹽水；同時(shí),正常組和模型組灌胃給予生理鹽水,竹節(jié)參總皂苷低、中、高劑量組分別灌胃給予50

2、mg/kg、100mg/kg、200mg/kg的竹節(jié)參總皂苷,陽性對(duì)照組灌胃給予200mg/kg的維生素E；每天1次,連續(xù)給藥8周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。第7周開始運(yùn)用Morris水迷宮方法檢測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。第8周,采取大鼠血和腦組織用于各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)：稱取腦重量后進(jìn)行腦重量指數(shù)的檢測(cè)；腦組織勻漿后進(jìn)行超氧化物歧化酶( SOD )和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性的檢測(cè)、總抗氧化能力(T-AOC)的檢測(cè)、丙二醛(MDA)含量的檢測(cè)；運(yùn)用

3、 ELISA 方法檢測(cè)腦組織中脂褐素的含量；取海馬組織經(jīng) HE 染色觀察病理形態(tài)學(xué)變化及電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)變化；運(yùn)用免疫組化方法進(jìn)行腦組織中 Nrf2 的表達(dá)分析；運(yùn)用Western-blot方法進(jìn)行細(xì)胞核內(nèi)Nrf2蛋白和腦組織中Bcl2、Bax蛋白的表達(dá)分析；運(yùn)用 Real-time PCR 方法進(jìn)行血紅素氧合酶(HO-1)、醌氧化還原酶(NQO1)和谷氨酸半胱氨酸連接酶(GCLC) mRNA的表達(dá)分析。
　　結(jié)果：1、學(xué)習(xí)

4、記憶能力檢測(cè)結(jié)果：與模型組相比,竹節(jié)參總皂苷各用藥組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力增強(qiáng),表現(xiàn)為縮短逃避潛伏期、延長(zhǎng)目的象限停留時(shí)間和增加經(jīng)過平臺(tái)的次數(shù)(P<0.05,P<0.01)。2、腦重量指數(shù)結(jié)果：與正常組相比,模型組大鼠腦重量指數(shù)明顯降低(P<0.05)；與模型組相比,各用藥組大鼠腦重量指數(shù)明顯升高(P<0.05, P<0.01)。3、氧化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果：與模型組相比,各用藥組能明顯降低腦組織中MDA含量,升高SOD、GSH-Px活性,增強(qiáng)T-A

5、OC(P<0.05,P<0.01)。4、脂褐素含量檢測(cè)：與正常組相比,模型組大鼠腦組織中脂褐素含量明顯下降；與模型組相比,用藥組脂褐素含量明顯增加(P<0.05,P<0.01)。5、HE 染色觀察：正常組大鼠海馬神經(jīng)元排列規(guī)則,胞核清晰；模型組大鼠海馬神經(jīng)元排列散亂,細(xì)胞體積變小并大量變性,胞核固縮呈不規(guī)則形狀；各用藥組能夠明顯改善海馬神經(jīng)細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞核固縮明顯減輕,細(xì)胞排列較整齊。6、電鏡觀察海馬超微結(jié)構(gòu)：正常組大鼠海馬線粒體數(shù)目較

6、多且線粒體內(nèi)嵴清晰；模型組線粒體數(shù)量減少且有空泡出現(xiàn),有少量脂褐素沉積；用藥組能改善線粒體的形態(tài),增加線粒體數(shù)量。7、免疫組化染色結(jié)果：模型組胞漿Nrf2表達(dá)較正常組表達(dá)多,而胞核內(nèi)Nrf2減少；用藥組Nrf2在細(xì)胞核內(nèi)的陽性表達(dá)較模型組增多。8、Western-blot 分析結(jié)果：與模型組比較,用藥組能顯著增加 Nrf2 在細(xì)胞核內(nèi)的蛋白表達(dá),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與正常組比較,模型組Bcl-2降低, Bax 表達(dá)升高,且

7、Bcl-2/Bax 比值降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較,用藥組Bcl-2表達(dá)升高,Bax表達(dá)降低,且Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05))。8、Real-time PCR分析結(jié)果：與正常組比較,模型組大鼠腦組織中HO-1、NQO1和GCLC的表達(dá)均顯著下降(P<0.05或P<0.05)；用藥組較模型組HO-1、NQO1和GCLC的表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05或P<0.01)。
　　結(jié)論：竹節(jié)參總皂苷對(duì) D