白藜蘆醇對D-半乳糖誘導細胞衰老的保護機制研究.pdf

1、目的：本研究旨在從細胞水平研究白藜蘆醇(Resveratrol, Res)對D-半乳糖誘導的WI-38衰老細胞的保護機制，探討MRG家族基因在Res抗衰老中的重要作用，為今后Res作為延緩衰老治療提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法：(1)MEM（Minimum Essential Medium）培養(yǎng)人胚肺成纖維細胞(WI-38),PDL(population doubling level)27代進行實驗。(2)建立衰老模型：D-半

2、乳糖8g/l、16g/l、32g/l、64g/l分別對WI-38細胞干預24h、48h、72h、96h、120h, MTT法檢測細胞增殖活力，繪制生長曲線。SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法檢測細胞衰老程度。(3)研究分組：WI-38(PDL=27)細胞為對照組、16g/l的D-半乳糖誘導細胞衰老組，兩種Res處理方式：衰老前Res預處理組、衰老后Res保護組。Res干預濃度為25μM、50μM、100μM、200μM、40

3、0μM，預處理干預時間2h,衰老后Res干預時間24h。MTT法檢測各干預組細胞增殖活力及SA-β-Gal染色法檢測細胞衰老程度，檢測各組總SOD活性。用RT-PCR檢測MORF4、MRG15、MRGX、PAM14的表達。SPSS16.0進行數(shù)據(jù)錄入及統(tǒng)計學分析，ImageJ灰度值分析。
　　 結(jié)果：WI-38細胞生長良好，對照組衰老染色可見藍染細胞比例小于10％。D半乳糖8gll、16g/l、32g/l、64g/l、128g/

4、l處理年輕WI-38細胞48h后，與對照相比各組細胞存活率呈現(xiàn)不同程度下降(P＜0.05)。SA-β-Gal染色不同時間下D-半乳糖8g/l、16g/l、32g/l處理后細胞染色率均高于對照組（P＜0.05）。100μM Res濃度下衰老細胞存活率最高，兩種Res處理方式間無差別（P＞0.05）。衰老后25μM、50μM Res保護組細胞存活率均高于同濃度衰老前預處理組(P＜0.05)。25μM、50μM、100μM、200μMRes保

5、護組染色率比衰老組分別降低了25.12％、33.02％、39.45％、32.31％，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。100μM濃度的Res作用于衰老組細胞后，其總SOD活性不僅高于衰老組，而且也高于對照組（P＜0.01）。衰老后Res各保護組總SOD活力均高于衰老組（P＜0.01）。100μMRes能明顯上調(diào)MORF4、MRG15基因的表達(P＜0.05),400μM Res可下調(diào)MORF4、MRG15基因的表達(P＜0.05)。<

6、br>　　 結(jié)論：1. D-半乳糖可誘導體外培養(yǎng)的WI-38細胞發(fā)生衰老改變，包括SA-p-Gal染色陽性率上升，細胞增殖能力降低。2.100μM Res濃度對衰老WI-38細胞保護作用最強，衰老后Res處理24h方式保護能力大于衰老前Res預處理2h方式。100μM Res濃度提高衰老WI-38細胞總SOD活性能力最強。3.100μM Res能明顯上調(diào)衰老細胞MORF4、MRG15基因的表達，而400μMRes處理衰老細胞后，MOR