竹節(jié)參皂苷對(duì)衰老大鼠腦組織氧化應(yīng)激和自噬途徑的作用研究.pdf

1、目的：通過制備24月齡自然衰老大鼠模型并用竹節(jié)參皂苷（SPJ）加以干預(yù)，研究SPJ對(duì)衰老大鼠腦組織的保護(hù)作用，并從氧化應(yīng)激和自噬途徑探討其發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制；通過H2O2誘導(dǎo)SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型，研究SPJ對(duì)SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，進(jìn)一步明確其對(duì)衰老大鼠腦組織的保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)一：將SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為：3月齡組（3M組）、9月齡組(9M組)、15月齡組（15M組），2

2、4月齡衰老組（24M組），SPJ低、中、高劑量組，各組均10只大鼠。大鼠從18月齡開始，按SPJ（10 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg）灌胃至24月，每周停藥兩天，連續(xù)6個(gè)月后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。處理后的大鼠運(yùn)用HE染色觀察海馬CA1、CA3和DG區(qū)神經(jīng)元形態(tài)變化，透射電鏡觀察海馬區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)，生化法檢測(cè)腦組織皮層中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性、丙二醛（MDA）的含量、Na+/K+-ATP

3、酶（ATPase）、Ca2+-ATPase和Ca2+/Mg2+-ATPase活性， Western Blot法測(cè)定腦組織海馬和皮層中p21、Bcl-2、Bax、沉默信息調(diào)節(jié)蛋白1（Sirt1）、過氧化物酶體增殖活化受體γ輔助活化因子1α（PGC-1α）、叉形頭轉(zhuǎn)錄因子的O亞型（Foxo3a）、微管相關(guān)蛋白I輕鏈3-II（LC3II）和Beclin1的蛋白含量。
　　實(shí)驗(yàn)二：將正常SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞分為正常對(duì)照組，H2O2（60

4、0μmol/L）處理組和H2O2+ SPJ（0.1μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、20μg/mL）預(yù)處理組。體外培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，加入SPJ孵育12小時(shí)，再加入H2O2作用12小時(shí)建立氧化應(yīng)激損傷模型進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，生化法檢測(cè)細(xì)胞乳酸脫氫酶（LDH）釋放量、SOD活性、MDA含量、活性氧（ROS）含量和線粒體膜電位（MMP），Hoechst33342觀察細(xì)胞形態(tài)，Western Blot法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Bc

5、l-2、Bax、Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3II和Beclin1的蛋白含量。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)一：與3M組青年大鼠比較，24M組衰老大鼠海馬CA1、CA3和DG區(qū)神經(jīng)元排列紊亂，且形狀不規(guī)則和核深染，胞核邊緣不清晰，且有大量脂褐質(zhì)沉積，海馬和皮層中p21蛋白表達(dá)顯著增加，Bcl-2/Bax的比值顯著下降；與24M組衰老大鼠比較，SPJ各劑量組能顯著改善衰老大鼠海馬CA1、CA3和DG區(qū)神經(jīng)元形態(tài)和海馬區(qū)

6、神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)，顯著降低腦組織海馬和皮層中p21蛋白含量、升高Bcl-2/Bax的比值，明顯增強(qiáng)腦皮層神經(jīng)元內(nèi)SOD和GSH-Px活力和降低MDA的含量，有效逆轉(zhuǎn)Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase和Ca2+/Mg2+-ATPase活性，不同程度地促進(jìn)Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3II和Beclin1蛋白的表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)二：與正常對(duì)照組比較，H2O2刺激SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞后細(xì)胞存活率顯著下降，L

7、DH釋放量、MDA含量、細(xì)胞內(nèi)ROS的含量明顯上升，SOD活力和MMP顯著下降；與H2O2組比較，SPJ能顯著增加H2O2致氧化應(yīng)激損傷SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞存活率，降低細(xì)胞上清中LDH釋放量、MDA含量、細(xì)胞內(nèi)ROS含量和細(xì)胞MMP，升高細(xì)胞內(nèi)SOD的活力；Hoechst33342染色觀察發(fā)現(xiàn)，SPJ各劑量組能夠明顯改善細(xì)胞凋亡形態(tài)；Western blot結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，SPJ各劑量組均能不同程度地升高Bcl-2/Bax的比值和促進(jìn)S