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文檔簡介
1、目的:探討三七總皂苷(Panax Notoginsenosides,PNS)通過線粒體凋亡途徑和自噬途徑對順鉑誘導(dǎo)大鼠腎損傷(Cisplatin-induced Nephroxicit,CIN)的保護(hù)作用,為臨床上順鉑腎損傷的治療提供理論依據(jù)。
方法:1.建立順鉑腎損傷大鼠模型:將108只雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白對照組,順鉑模型組,順鉑+PNS組;在給藥1、4、8天后,檢測大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和尿β-N-乙酰
2、胺基葡萄糖苷酶(NAG)水平。采用HE染色觀察大鼠腎臟病理變化,利用透射電子顯微鏡觀察大鼠腎臟細(xì)胞及線粒體形態(tài)。
2.PNS對順鉑誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響:采用原位末端缺口標(biāo)記法(TUNEL染色)檢測腎小管上皮細(xì)胞凋亡情況,通過免疫組化SP法檢測1、4、8天腎組織中凋亡相關(guān)蛋白Bax、Caspase9表達(dá),并采用western blot檢測1、4、8天組織中凋亡關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)情況。
3.PNS對順鉑誘導(dǎo)腎
3、小管上皮細(xì)胞自噬的影響:利用透射電子顯微鏡觀察第一天大鼠腎臟腎小管上皮細(xì)胞自噬體的發(fā)生,通過免疫組化SP法檢測HIF-1的表達(dá),通過Western blot檢測自噬蛋白LC3、Beclin1、BNIP3、Atg5蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:1.建立順鉑腎損傷大鼠模型:大鼠暴露于順鉑1、4、8天后,與空白對照組比較,順鉑模型組大鼠血清Cr、BUN和尿NAG水平顯著升高(P<0.01),腎組織病理檢查發(fā)現(xiàn)腎小管損害明顯加重,腎小管上皮細(xì)胞
4、線粒體損傷嚴(yán)重;與順鉑模型組比較,順鉑+PNS組血清Cr、BUN和尿NAG水平明顯降低(P<0.01),腎小管上皮細(xì)胞線粒體和腎組織損害明顯改善。
2.PNS對順鉑誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響:與空白對照組比較,順鉑模型組腎組織的細(xì)胞凋亡率顯著增加(P<0.01),腎組織Bax、Caspase9及Bcl-2表達(dá)均顯著增強(qiáng)(P<0.01);與順鉑模型組比較,順鉑+PNS組腎組織細(xì)胞凋亡率和Bax、Caspase9表達(dá)水平均顯著降
5、低(P<0.01),Bcl-2的表達(dá)則顯著增強(qiáng)(P<0.01)。
3.PNS對順鉑誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞自噬的影響:大鼠暴露于順鉑24h后,與空白對照組比較,電鏡觀察到順鉑模型組自噬體出現(xiàn)增加,腎組織LC3、HIF-1、Beclin1、BNIP3、Atg5蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.01)。與順鉑模型組比較,順鉑+PNS組自噬體增多,腎組織LC3、HIF-1、Beclin1、BNIP3、Atg5蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.01)。
6、r> 結(jié)論:1.順鉑可升高大鼠腎功能指標(biāo)血清Cr、BUN和尿NAG水平,對大鼠腎臟造成損傷,三七總皂苷可降低這些指標(biāo),對順鉑腎損傷有保護(hù)作用,同時說明大鼠腎順鉑腎損傷模型成功。
2.三七總皂苷可減少順鉑誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮保護(hù)順鉑腎損害的作用,其可能機(jī)制是通過增加抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá),減少促凋亡蛋白Bax和凋亡相關(guān)蛋白Caspase9的表達(dá)來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡。
3.三七總皂苷可能通過增強(qiáng)腎組織的保
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