2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  觀察幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白(Tipα)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-8的分子機制。
  方法:
  體外培養(yǎng)人單核細(xì)胞系 THP-1,用佛波脂(PMA)誘導(dǎo)其分化為巨噬細(xì)胞后,采用30~200μg/ml的Tipα刺激4h,實時定量PCR(real time PCR)檢測核仁素(C23)和Toll樣受體4(TLR4)mRNA的表達;分別采用C23和

2、TLR4 siRNA干擾巨噬細(xì)胞后,觀察其對Tipα誘導(dǎo)TNF-α和IL-8的影響;采用5μg/mL衣霉素預(yù)處理細(xì)胞抑制N-糖鏈合成,隨后用Tipα刺激24h,觀察其對TNF-α和IL-8分泌的影響;分別采用 C23和Tipα抗體沉淀蛋白,隨后分別采用 Tipα和C23抗體行Western blot分析;采用C23 siRNA干擾其表達后,Western blot分析IκB表達水平以及細(xì)胞核中p65含量;采用蛋白酶體抑制劑MG-132處

3、理細(xì)胞,ELISA檢測其對TNF-α和IL-8的影響。
  結(jié)果:
  (1)Real time PCR結(jié)果顯示,30~200μg/ml Tipα處理巨噬細(xì)胞4h后,C23的mRNA水平明顯增高,且隨著Tipα劑量的增加,mRNA表達水平有增高的趨勢。TLR4 mRNA水平在Tipα處理前后無明顯變化;
  (2)ELISA結(jié)果顯示C23 siRNA轉(zhuǎn)染后,Tipα刺激后TNF-α和IL-8顯著降低,而TLR4 siR

4、NA轉(zhuǎn)染對TNF-α和IL-8分泌無明顯影響;
  (3)5μg/ml衣霉素預(yù)處理8h后,ELISA結(jié)果顯示Tipα刺激后TNF-α和IL-8明顯低于未處理組;
  (4)采用C23抗體沉淀蛋白后,可檢測到明顯的Tipα條帶。同時,預(yù)先使用Tipα抗體沉淀蛋白,也可檢測出C23條帶;
  (5)Tipα處理巨噬細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)IκB水平明顯降低。C23 siRNA干擾其表達后,IκB降解受到抑制;Tipα可增加細(xì)胞核內(nèi)p

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