參與腦缺血損傷和保護機制的蛋白靶點篩查.pdf

1、第一軍醫(yī)大學博士學位論文參與腦缺血損傷和保護機制的蛋白靶點篩查姓名：陳亮申請學位級別：博士專業(yè)：神經生物學指導教師：高天明20070520摘要立的；作用對象也是廣泛的，包括了神經細胞、膠質細胞和血管元件；在亞細胞水平上，它們涉及線粒體、核、細胞膜、內質網和溶酶體等多個細胞器已知一些蛋白分子(包括離子通道、線粒體呼吸鏈成分、細胞內信號轉導分子)的表達變化參與甚至決定了這些機制的進行。在以上這些主要已知的細胞死亡途徑中，線粒體是已知最重要的

2、細胞器之一。線粒體包含了一系列促凋亡因子，包括細胞色素C、繼發(fā)性線粒體源性caspase激活因子(secondarymitochondrialactivatorofcaspase。Smac／Diablo)、核酸內切酶、A腰等，線粒體上轉運孔道的形成，氧化磷酸化相關成分的變化都是線粒體成為關鍵細胞器的原因。為了找到新的參與細胞損傷或者保護機制的線粒體組分，本研究在短暫性全腦缺血神經元遲發(fā)性死亡模型上，提取純化線粒體后選擇觀察了缺血前后線粒

3、體蛋白表達羞的變化。在現(xiàn)有的蛋白質組學技術平臺中，雙向電泳(twodimensionalelectrophoresis，2DE)技術已經是一種成熟的蛋白分離技術，因其能夠同時分離和顯示數(shù)以千計的蛋白這一獨特優(yōu)勢，以及相關儀器和試劑成本相對低廉，成為大多數(shù)研究者的首選。2004年新發(fā)明的“SilverBlue”染色方法是對1988年NeuhoffJY法的改進，這種膠體考馬斯亮藍G250染色法已經能達到ng級敏感度，改變了以往mg級上樣量也

4、只能得到不足一千個點的狀況。應用這種方法，我們在lmg總l樣量時常能得到兩千余蛋白斑點。并且其很好的可重復性是銀染很難達到的。研究采用的質譜方法是基質輔助激光解吸電離飛行時闖質譜(matrixassistedlaserdesorption／ionizationtimeofflightmassspectrometry，MAU)I1DFMS)和時間串聯(lián)質譜(MAIDl1DF／1DFMS)，后者可以將酶解肽段進一步解離成次第減少一個氨基酸的肽