PPARγ和腦缺血損傷的關(guān)系及保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、過氧化小體增殖劑激活型受體γ(PPARγ)屬于核受體超家族成員，是一種配體激活型轉(zhuǎn)錄因子，其可將體內(nèi)穩(wěn)態(tài)變化和病理刺激等轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞內(nèi)信號(hào)通過與特異的DNA反應(yīng)元件作用后控制基因的表達(dá)。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示給予PPARγ激活劑后炎性細(xì)胞活性受抑制；腎臟和心肌等缺血再灌注損傷時(shí)存在PPARγ表達(dá)下調(diào)，同時(shí)通過腎臟、心肌、肺等組織臟器的缺血再灌注動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究顯示，給予外源性的PPARγ激活劑后可下調(diào)炎性反應(yīng)從而減輕缺血性損傷，以上提示PPAR

2、γ可能和缺血性病變時(shí)的炎性損傷存在一定的關(guān)系。臨床實(shí)驗(yàn)研究顯示，腦梗死患者急性期周圍血淋巴細(xì)胞存在PPARγ表達(dá)下調(diào)，同時(shí)PPARγ表達(dá)低的患者，血清IL-6水平(在一定程度上可以反映炎性程度的強(qiáng)弱)高，并且梗死體積大，這種相關(guān)性提示PPARγ表達(dá)下調(diào)后可能使炎性反應(yīng)的調(diào)控作用減弱，進(jìn)而導(dǎo)致腦缺血性炎性損傷。但周圍血淋巴細(xì)胞中PPAR7表達(dá)下調(diào)是否可以顯示腦組織缺血性病變時(shí)也存在PPARγ表達(dá)的下調(diào)，尚不能肯定。另外，小腦顆粒細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)

3、驗(yàn)還顯示，PPARγ激活劑還可以通過降低iNOS的表達(dá)和活性而減少細(xì)胞凋亡，因此推測腦血后iNOS的表達(dá)的增加可能也和PPARγ表達(dá)下調(diào)有關(guān)(PPRγ表達(dá)下調(diào)后，對(duì)iNOS表達(dá)的抑制調(diào)控作用降低，進(jìn)而導(dǎo)致了NO生成的增加)，并進(jìn)一步導(dǎo)致了細(xì)胞凋亡。以上提示PPARγ可能和腦缺血損傷存在一定的關(guān)系，將其作為一干預(yù)靶點(diǎn)進(jìn)行研究對(duì)于探索如何保護(hù)缺血腦組織可能具有重要的意義。如果上述推測(加下劃線部分)存在合理性，那么給予外源性激活劑應(yīng)該能減輕

4、腦缺血損傷，同時(shí)出現(xiàn)炎性反應(yīng)和iNOS的表達(dá)及活性的下調(diào)，NO的生成也應(yīng)該下降。本實(shí)驗(yàn)將對(duì)上述問題進(jìn)行分析和討論。 第一部分大鼠缺血再灌注腦組織PPAR7表達(dá)變化 研究目的：探討實(shí)驗(yàn)性缺血再灌注大鼠腦組織PPAR7 mRNA和蛋白的表達(dá)變化，結(jié)合文獻(xiàn)分析其和腦缺血損傷的關(guān)系。 研究方法：建立SD大鼠MCAO缺血90min再灌注模型。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、假手術(shù)組和缺血再灌注組。缺血再灌注組取缺血后12h、24h和48h

5、三個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察。用RT-PCR方法及Western blotting方法分別檢測PPARγ mRNA和蛋白的表達(dá)。 研究結(jié)果：腦缺血再灌注組PPAR7 mRNA和蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組和假手術(shù)組明顯降低。通過對(duì)缺血后12h、24h和48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)態(tài)變化觀察顯示，缺血后12h表達(dá)最低，并且隨缺血后時(shí)間的推移，其表達(dá)逐漸增加，存在顯著性差異。但缺血后48h的表達(dá)值仍低于正常對(duì)照組和假手術(shù)組。 結(jié)論：缺血再灌注腦組織P

6、PARγ表達(dá)下調(diào)可能通過炎性機(jī)制和凋亡參與了腦缺血病理損傷，提示針對(duì)PPARγ作為一靶點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)可能對(duì)于缺血性腦血管病的治療是一個(gè)新的研究方向。 第二部分PPAR7激活劑對(duì)大鼠缺血再灌注腦組織損傷的影 響及對(duì)PPARv表達(dá)的影響 研究目的：明確不同劑量的PPAR7激活劑對(duì)缺血再灌注腦組織損傷的影響及對(duì)PPAR7表達(dá)變化的影響。 研究方法：健康雄性SD大鼠分為假手術(shù)組、生理鹽水干預(yù)組、小劑量吡格列酮(PPAR

7、),激活劑)干預(yù)組、大劑量吡格列酮干預(yù)組。MCAO前3天分別給予吡咯列酮，每日一次灌胃給藥。劑量分別是：小劑量組為10mg／Kg.d，大劑量組為15mg／kg．d；生理鹽水干預(yù)組僅給予等量生理鹽水；假手術(shù)組亦給予等量生理鹽水。以缺血后24h作為觀察時(shí)間點(diǎn)，對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行比較分析。TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡，TTC染色測定腦梗死體積，生物化學(xué)方法檢測腦組織EB含量(反應(yīng)血腦屏障通透性變化)，RT-PCR和Western blotting方法分

8、別檢測PPARγmRNA和蛋白的表達(dá)，血壓測定儀測定大鼠血壓變化，全自動(dòng)生化分析儀測定血糖、膽固醇、甘油三酯變化，放射免疫法測定血清胰島素水平(排除吡格列酮通過對(duì)代謝和血壓的調(diào)節(jié)而干擾了對(duì)腦缺血后所要觀察指標(biāo)的影響)。 研究結(jié)果： 1．PPARγ激活劑可以明顯降低腦梗死體積，改善血腦屏障通透性和減少細(xì)胞凋亡。并且大劑量干預(yù)組較小劑量干預(yù)組效果顯著。 2．兩種不同劑量的PPARγ激活劑對(duì)動(dòng)物的血糖、血脂、胰島素水平

9、及血壓變化無影響。 3．PPARγ激活劑可以促進(jìn)PPARγ mRNA和蛋白表達(dá)的增加，并且呈現(xiàn)出隨吡格列酮?jiǎng)┝康脑黾佣龈叩内厔荨?研究結(jié)論：PPARγ激活劑可以促進(jìn)缺血再灌注腦組織PPARγmRNA和蛋白的表達(dá)，并且當(dāng)干預(yù)劑量增加的同時(shí)，伴隨著PPARγ表達(dá)的進(jìn)一步增加，其所呈現(xiàn)出的對(duì)缺血腦組織的保護(hù)作用也進(jìn)一步增強(qiáng)，以上提示將PPARγ作為一靶點(diǎn)，利用其激活劑對(duì)其進(jìn)行干預(yù)可以對(duì)缺血再灌注腦組織產(chǎn)生保護(hù)作用。

10、第三部分PPARy激活劑對(duì)大鼠缺血再灌注腦組織損傷保護(hù)作用機(jī)制的探討 研究目的：探討PPARγ激活劑對(duì)缺血再灌注腦組織保護(hù)作用的炎性機(jī)制和細(xì)胞凋亡機(jī)制。 研究方法：動(dòng)物分組、給藥方法及選擇觀察時(shí)間點(diǎn)同上。生物化學(xué)方法測定MPO(反應(yīng)中性粒細(xì)胞聚集)和iNOS的活性及NO的生成，RT-PCR方法測定ICAM-1、IL-1β、MMP-9、iNOS的mRNA表達(dá)水平。 研究結(jié)果：吡格列酮可以顯著下調(diào)缺血再灌注腦組織MP

11、O和iNOS活性并減少NO的生成，同時(shí)下調(diào)ICAM-1、IL-lβ、MMP-9、iNOS的mRNA表達(dá)水平。上述指標(biāo)均呈現(xiàn)出隨吡格列酮?jiǎng)┝康脑黾佣抡{(diào)幅度增強(qiáng)的趨勢，除MMP-9外其余指標(biāo)均顯示大劑量給藥組較小劑量給藥組下調(diào)明顯。 研究結(jié)論：PPARγ激活劑應(yīng)用后，可以減少缺血再灌注腦組織中性粒細(xì)胞的浸潤，同時(shí)下調(diào)IL-1β、ICAM-1、MMP-9、iNOS的mRNA表達(dá)及iNOS活性，并減少NO的生成，以上提示調(diào)控炎性損傷路