去甲斑蝥素抗血管生成的雞胚絨毛尿囊膜實驗研究.pdf

1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文去甲斑蝥素抗血管生成的雞胚絨毛尿囊膜實驗研究姓名：林曉燕申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導教師：費哲為20060901后，將不同劑量的NCTD(72，36，18，9pg20pL1胚1天。)加在明膠海綿載體上，以生理鹽水(20llL胚一天1)為溶劑對照，繼續(xù)孵育，共3天。雞胚發(fā)育第11天，固定取膜，解剖顯微鏡下觀察并記錄載體周圍5mm范圍內的可見血管分支點數(shù)。血管生成抑制率按照下面公式計算：血管生成抑制率(％)=(對

2、照組血管分支點數(shù)一給藥組血管分支點數(shù))／對照組血管分支點數(shù)x100％。2去甲斑蝥素對人乳腺癌MCF7細胞株雞胚絨毛尿囊膜移植瘤血管生成的影響將成功培養(yǎng)的人乳腺癌MCF7細胞以8x101／ml濃度按每胚100uL接種于孵育7天的雞胚上，繼續(xù)孵育。其中部分雞胚每天于體視顯微鏡下原位觀察移植腫瘤的成活、形態(tài)以及周圍血管生長情況，記錄其生長特性，體積V(T盥3)=04a2Xb(a為長徑，b為寬徑)，以5個瘤體及其均數(shù)代表腫瘤當日齡的體積，繪制生

3、長曲線。其余雞胚隨機分為72ug／胚組，36ug／胚組，18ug／胚組，以及生理鹽水對照組，每組6枚，腫瘤細胞接種24小時后，分別給予不同劑量的NCTD(72，36，18pg20pL_l胚～天1)以及生理鹽水(20uL胚一天1)，共3天。接種第4天(雞胚發(fā)育第1l天)時對移植瘤取材，觀察計數(shù)腫瘤周圍5mm范圍內大、小血管數(shù)目，計算血管生成抑制率。移植瘤標本經(jīng)固定，石蠟包埋、切片，HE和IHC染色，分別進行VEGF、CD34檢測，測定腫瘤

4、組織內MVI)。結果分析采用Image—ProPlus50圖像分析軟件。采用SPSSll5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)標準差表示，兩組之間采用成組t檢驗，兩組以上采用多因素方差分析；計數(shù)資料采用卡方檢驗。以雙側P005為差異有統(tǒng)計學意義，雙側P001為差異有顯著統(tǒng)計學意義。結果(1)在雞胚絨毛尿囊膜模型中，去甲斑蟊素對以明膠海綿為載體的雞胚絨毛尿囊膜血管生成具抑制作用，且呈劑量依賴性。NCTD72ug、36ug，18ug，9u