去甲斑蝥素抗血管生成的雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文去甲斑蝥素抗血管生成的雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)研究姓名：林曉燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：費(fèi)哲為20060901后，將不同劑量的NCTD(72，36，18，9pg20pL1胚1天。)加在明膠海綿載體上，以生理鹽水(20llL胚一天1)為溶劑對(duì)照，繼續(xù)孵育，共3天。雞胚發(fā)育第11天，固定取膜，解剖顯微鏡下觀察并記錄載體周圍5mm范圍內(nèi)的可見血管分支點(diǎn)數(shù)。血管生成抑制率按照下面公式計(jì)算：血管生成抑制率(％)=(對(duì)

2、照組血管分支點(diǎn)數(shù)一給藥組血管分支點(diǎn)數(shù))／對(duì)照組血管分支點(diǎn)數(shù)x100％。2去甲斑蝥素對(duì)人乳腺癌MCF7細(xì)胞株雞胚絨毛尿囊膜移植瘤血管生成的影響將成功培養(yǎng)的人乳腺癌MCF7細(xì)胞以8x101／ml濃度按每胚100uL接種于孵育7天的雞胚上，繼續(xù)孵育。其中部分雞胚每天于體視顯微鏡下原位觀察移植腫瘤的成活、形態(tài)以及周圍血管生長(zhǎng)情況，記錄其生長(zhǎng)特性，體積V(T盥3)=04a2Xb(a為長(zhǎng)徑，b為寬徑)，以5個(gè)瘤體及其均數(shù)代表腫瘤當(dāng)日齡的體積，繪制生

3、長(zhǎng)曲線。其余雞胚隨機(jī)分為72ug／胚組，36ug／胚組，18ug／胚組，以及生理鹽水對(duì)照組，每組6枚，腫瘤細(xì)胞接種24小時(shí)后，分別給予不同劑量的NCTD(72，36，18pg20pL_l胚～天1)以及生理鹽水(20uL胚一天1)，共3天。接種第4天(雞胚發(fā)育第1l天)時(shí)對(duì)移植瘤取材，觀察計(jì)數(shù)腫瘤周圍5mm范圍內(nèi)大、小血管數(shù)目，計(jì)算血管生成抑制率。移植瘤標(biāo)本經(jīng)固定，石蠟包埋、切片，HE和IHC染色，分別進(jìn)行VEGF、CD34檢測(cè)，測(cè)定腫瘤

4、組織內(nèi)MVI)。結(jié)果分析采用Image—ProPlus50圖像分析軟件。采用SPSSll5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組之間采用成組t檢驗(yàn)，兩組以上采用多因素方差分析；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。以雙側(cè)P005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，雙側(cè)P001為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果(1)在雞胚絨毛尿囊膜模型中，去甲斑蟊素對(duì)以明膠海綿為載體的雞胚絨毛尿囊膜血管生成具抑制作用，且呈劑量依賴性。NCTD72ug、36ug，18ug，9u