β淀粉樣肽和岡田酸對(duì)大鼠大腦海馬和SH-SY5Y細(xì)胞中M1毒蕈堿樣受體表達(dá)的影響.pdf

1、目的：用β-淀粉樣肽（Aβ）和岡田酸（OA）經(jīng)大鼠側(cè)腦室注射和處理體外培養(yǎng)的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SH-SY5Y），來研究 Aβ沉積和Tau蛋白過度磷酸化對(duì) M1毒蕈堿樣乙酰膽堿能受體（M1AChR）表達(dá)的影響，探討阿爾茨海默氏病發(fā)病機(jī)制中學(xué)習(xí)記憶障礙的發(fā)生機(jī)制。
　　方法：選用 Aβ1-42、OA和Aβ1-42+OA側(cè)腦室注射 SD大鼠大腦海馬區(qū)組織，用 Morris水迷宮對(duì)大鼠進(jìn)行定向航行及空間探索試驗(yàn)，采用蛋白印跡法（West

2、ern blotting）檢測(cè)淀粉樣肽前體蛋白(APP)、Tau蛋白磷酸化（ser-404位點(diǎn)）和M1AChR蛋白表達(dá)水平；分析實(shí)驗(yàn)大鼠行為學(xué)改變和M1AChR的相關(guān)關(guān)系。
　　用不同濃度的Aβ1-42和OA處理 SH-SY5Y細(xì)胞，培養(yǎng)24小時(shí)，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞還原率，選擇 Aβ1-42和OA處理細(xì)胞的最佳濃度。然后用1μmol/L的Aβ1-42、20nmol/L的OA以及1μmol/L Aβ1-42+20nmol/L OA

3、分別處理 SH-SY5Y細(xì)胞，培養(yǎng)24小時(shí)；采用 Western blotting檢測(cè)三種不同方式處理的SH-SY5Y細(xì)胞中 APP、Tau蛋白磷酸化和M1AChR蛋白的表達(dá)水平，用 Real-time PCR方法檢測(cè)M1AChR的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：Morris水迷宮各注射組的定向航行試驗(yàn)結(jié)果顯示大鼠平均逃避潛伏期延長(zhǎng)，空間探索試驗(yàn)結(jié)果顯示大鼠第一次穿越平臺(tái)時(shí)間延長(zhǎng)及平臺(tái)穿越次數(shù)減少。鼠腦海馬區(qū)組織中，Aβ1-42注射

4、組（1mg/L）的APP蛋白表達(dá)水平和Tau蛋白磷酸化水平升高，M1AChR的蛋白表達(dá)水平明顯降低。OA注射組（0.4mmol/L）的Tau蛋白磷酸化水平顯著升高，M1AChR的蛋白表達(dá)水平明顯降低，APP蛋白表達(dá)水平無明顯改變。Aβ1-42+OA注射組的APP蛋白表達(dá)水平和Tau蛋白磷酸化水平均升高，M1AChR的蛋白表達(dá)水平降低。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中各試驗(yàn)結(jié)果與鼠腦海馬區(qū)各注射組的M1AChR蛋白表達(dá)水平有明顯相關(guān)性。
　

5、　經(jīng)1μmol/L濃度的Aβ1-42處理 SH-SY5Y細(xì)胞后，細(xì)胞中 APP蛋白表達(dá)水平和Tau蛋白磷酸化水平升高，M1AChR的蛋白表達(dá)水平和mRNA表達(dá)水平均降低。；經(jīng)20 nmol/L濃度的OA處理 SH-SY5Y細(xì)胞后，細(xì)胞中 APP蛋白表達(dá)水平無明顯改變，但 Tau蛋白磷酸化水平顯著升高，M1AChR的蛋白表達(dá)水平和mRNA表達(dá)水平均明顯降低。經(jīng) Aβ1-42和OA聯(lián)合處理 SH-SY5Y細(xì)胞后，細(xì)胞中 APP蛋白表達(dá)水平和

6、Tau蛋白磷酸化水平均升高，M1AChR的蛋白表達(dá)水平和mRNA表達(dá)水平均明顯降低。
　　結(jié)論：Aβ1-42可以引起鼠腦海馬區(qū)和SH-SY5Y細(xì)胞的APP蛋白高表達(dá)。Aβ1-42和OA可以導(dǎo)致鼠腦海馬區(qū)和SH-SY5Y細(xì)胞的Tau蛋白過度磷酸化，Aβ1-42、OA及 Aβ1-42+OA聯(lián)合處理的細(xì)胞中，M1AChR的蛋白表達(dá)水平和mRNA表達(dá)水平均降低，鼠腦海馬區(qū)組織中，M1AChR的蛋白表達(dá)水平降低。與 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)