α7神經(jīng)型尼古丁受體表達抑制對SH-SY5Y細胞β-分泌酶和氧化應激的影響及其機制研究.pdf

1、【目的】研究α7神經(jīng)型尼古丁受體(Neuronal nicotinic acetylcholine receptor，nAChR)基因表達抑制后該受體對細胞淀粉樣蛋白前體蛋白(Amyloid precursor protein，APP)代謝及細胞氧化應激水平的影響，從而了解α7 nAChR的神經(jīng)保護作用，以及該受體與阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)發(fā)病機制的關系。
　　【方法】 SH-SY5Y細胞轉染針

2、對α7 nAChR的小分子干擾 RNA(Small interference RNA，siRNA)，用 Real-time PCR法和蛋白免疫印跡(Western Blotting)法分別測定細胞中α7 nAChR、β-分泌酶兩個亞型(BACE1和BACE2)在 mRNA和蛋白表達水平的變化；用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定 Aβ1-42含量的變化；并用終濃度為1μmol/L的Aβ1-42處理培養(yǎng)的α7 nAChR表達抑制細

3、胞48 h，比色法測定細胞脂質過氧化產(chǎn)物丙二醛(Malondialdehyde，MDA)水平、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-PX)活性。
　　【結果】轉染針對α7 nAChR基因的siRNA后，與空白對照組細胞相比，α7 nAChR mRNA及蛋白表達水平分別降低了84％和79%；BACE1 mRNA及蛋白表達水平分別升

4、高了527%和71%；BACE2 mRNA及蛋白表達水平分別降低了58%和75%；Aβ1-42含量升高了208%；細胞脂質過氧化產(chǎn)物 MDA升高38%；SOD和GSH-PX活性分別降低30%和21%。用終濃度為1μmol/L的Aβ1-42處理后氧化應激水平增強：細胞脂質過氧化產(chǎn)物 MDA升高61%；SOD和GSH-PX活性分別降低35%和21%，且α7 nAChR基因表達抑制后能增強 Aβ的致氧化應激作用。
　　【結論】轉染針對α

5、7 nAChR基因 siRNA片段能有效地抑制細胞內源性α7 nAChR基因的表達；α7 nAChR基因表達抑制可增加 Aβ1-42的含量，其機制可能與α7 nAChR基因沉默后增加 BACE1基因的表達水平、降低 BACE2基因的表達水平進而影響 APP的切割有關。Aβ能通過誘導氧化應激損傷細胞，α7 nAChR基因表達抑制能誘導細胞氧化應激損傷并能增加 Aβ的神經(jīng)毒性作用，這可能與 AD的發(fā)病機制有關。間接表明α7 nAChR在 A