洛伐他汀對抗_-淀粉樣肽引起的體外培養(yǎng)神經(jīng)細胞毒蕈堿型乙酰膽堿能受體表達降低及氧化應(yīng)激水平增高的作用.pdf

1、目的：阿爾茨海默氏?。ˋlzheimer’s disease，AD）的病因及發(fā)病機制仍未完全清楚，極大的限制了臨床治療藥物的開發(fā)，由于β-淀粉樣肽（β-Amyloid peptide，Aβ）的神經(jīng)毒性作用是AD發(fā)病過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因此，本課題采用傳統(tǒng)上降低膽固醇的史他汀類藥物—洛伐他汀，研究其對抗 A?引起的神經(jīng)毒性作用，特別是對抗 A?神經(jīng)毒性作用過程中毒蕈堿型乙酰膽堿能受體(Muscarinic acetylcholine rece

2、ptors，mAChRs)表達和氧化應(yīng)激水平等的改變，探討他汀類藥物在AD治療中的非膽固醇依賴性神經(jīng)保護作用。 方法:選擇體外培養(yǎng)的原代大鼠海馬神經(jīng)細胞和人骨髓神經(jīng)母細胞瘤細胞（SH-SY5Y），采用免疫熒光雙染法檢測NeuN和GFAP進行原代大鼠海馬神經(jīng)細胞純度鑒定。用洛伐他汀、Aβ寡聚體（?-Amyloid peptide oligomers，A?Os）分別或合并處理細胞24 h~48 h，采用CCK-8法檢測細胞的存活率；蛋白

3、印跡法（Western blotting）和實時熒光定量PCR（Real-time PCR）檢測細胞中M1 mAChR和M3 mAChR的蛋白及mRNA表達水平；生物化學(xué)方法測定細胞內(nèi)膽固醇、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）活性及氧自由基(OH-、H2O2、O2·-)等

4、的變化。
　　結(jié)果：（1）原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)細胞純度達到85%以上；0.01μmol/L或0.1μmol/L洛伐他汀處理細胞，不會引起細胞活性和膽固醇水平明顯改變（P＜0.05）。（2）洛伐他汀對mAChRs的作用：0.01μmol/L或0.1μmol/L洛伐他汀處理神經(jīng)細胞24 h，M1 mAChR和M3 mAChR的蛋白及mRNA表達水平明顯增加（P＜0.05）。（3）洛伐他汀抗AβOs對mAChRs的作用：0.5μmol

5、/L AβOs處理神經(jīng)細胞48 h，M1 mAChR和M3 mAChR的蛋白及mRNA表達水平明顯下降（P＜0.05），但預(yù)先用0.1μmol/L洛伐他汀處理細胞24 h，可減輕AβOs導(dǎo)致的M1 mAChR和M3 mAChR的蛋白及mRNA表達水平改變（P＜0.05）。（4）洛伐他汀對抗AβOs的細胞毒性作用：0.5μmol/L A?Os處理兩種神經(jīng)細胞48 h，MDA含量增加、SOD和GSH-Px活性降低、氧自由基(OH-、H2O2

6、、O2·-)水平明顯增加（P＜0.05）；給予A?Os前預(yù)先用0.1μmol/L洛伐他汀處理神經(jīng)細胞24 h，可減弱A?Os引起的MDA含量、SOD及GSH-Px活性、氧自由基水平等改變（P＜0.05）。
　　結(jié)論：（1）0.01?mol/L及0.1?mol/L洛伐他汀處理細胞，不會引起細胞活性和膽固醇水平明顯改變。（2）洛伐他汀可能通過上調(diào) M1 mAChR和M3 mAChR的表達對抗Aβ毒性作用。（3）洛伐他汀可緩解AβOs引