人FL重組蛋白分離純化工藝的建立及其在急性輻射損傷小鼠救治中的運(yùn)用.pdf

1、 本研究在已成功地克隆和高效表達(dá)人FL重組蛋白的工作基礎(chǔ)上，展開了以下幾方面的實(shí)驗(yàn)研究：建立rhFL的分離純化工藝，獲得足夠量的、高純度且具有生物學(xué)活性的重組FL蛋白；采用亞致死劑量6.0Gy60Coγ照射BALB/C小鼠造成急性輻射損傷，在輻射前、后用FL、G-CSF、EPO、IL-11等單獨(dú)或聯(lián)合進(jìn)行救治，觀察外周血細(xì)胞、骨髓細(xì)胞集落培養(yǎng)CFU-MIX計(jì)數(shù)及生存期的改變；同時(shí)做光鏡切片，觀察小鼠各臟器的形態(tài)學(xué)改變，從而分析這些

2、細(xì)胞因子對(duì)急性輻射損傷小鼠骨髓造血功能的恢復(fù)，各臟器的輻射防護(hù)效應(yīng)及生存期的改變，為臨床放、化療病人的治療提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)參數(shù)；rhFL對(duì)造血系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞株細(xì)胞(Raji)的體外作用研究，為FL在臨床中的應(yīng)用提供有價(jià)值的資料?！　⊙芯拷Y(jié)果表明：采用全自動(dòng)發(fā)酵裝置，獲得畢氏酵母高效表達(dá)rhFL，再經(jīng)DEAE離子柱、凝膠過濾柱SUPERDEXtm-200prepgrade和FPLC分離系統(tǒng)進(jìn)行分離純化，最終獲得較高純度的重組蛋白，經(jīng)

3、Raji細(xì)胞對(duì)FL的增殖實(shí)驗(yàn)和造血細(xì)胞體外集落形成實(shí)驗(yàn)分析，證明所得的重組蛋白有良好的生物學(xué)活性；FL、G-CSF、EPO、IL-11單獨(dú)或聯(lián)合處理可明顯增加受輻照小鼠的骨髓細(xì)胞、外周血WBC、PLT、RBC和CFU-MIX的數(shù)量，與對(duì)照組相比均有顯著性差異。切片觀察，重組FL對(duì)小鼠的肝、心、肺、腎有明顯治療作用，與對(duì)照組相比，能明顯提高實(shí)驗(yàn)組小鼠的生存率，提示FL等細(xì)胞因子對(duì)受輻照小鼠的骨髓造血功能具有明顯生物學(xué)效應(yīng)，動(dòng)物模型中獲得的