重組白蛋白（rHSA）純化工藝優(yōu)化研究.pdf

1、白蛋白臨床使用多年，對多種疾病有確切的療效，目前因血液污染日益嚴(yán)重，從DNA技術(shù)開發(fā)一種安全可靠的替代產(chǎn)品有極為重要的意義。采用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的白蛋白，內(nèi)含的雜質(zhì)組分與血源白蛋白中完全不同，由于其臨床用藥高達(dá)幾十克，是生物技術(shù)領(lǐng)域唯一的克級(jí)用藥產(chǎn)品，因此對產(chǎn)品純度有著極為嚴(yán)格的要求，尤其是源于宿主菌的雜質(zhì)成分，因此控制異源雜質(zhì)含量成為課題開發(fā)的重點(diǎn)。 本文通過大量介質(zhì)篩選，選擇了一種新型陽離子和一種新型陰離子介質(zhì)替代傳統(tǒng)的分離

2、介質(zhì)，通過工藝研究開發(fā)了一條新型高鹽陽離子捕獲為特色的純化工藝，發(fā)酵上清無需稀釋可直接上柱純化，縮短了工藝周期。新型高鹽陽離子特殊的配基結(jié)構(gòu)使其具有更強(qiáng)的選擇性。經(jīng)過研究確定的純化工藝路線：對發(fā)酵上清液進(jìn)行加熱滅活蛋白酶一樹脂脫色一陽離子捕獲一疏水純化一ConA親和層析一陰離子層析…濃縮一無菌分裝。并用此工藝制備了產(chǎn)品。建立了色素雜質(zhì)、宿主蛋白和宿主殘?zhí)恰堄郉NA等各項(xiàng)異源雜質(zhì)的分析檢測方法，對純化過程中異源雜質(zhì)的去除進(jìn)行了詳細(xì)的分析

3、。分析結(jié)果顯示，經(jīng)過純化后重組白蛋白終產(chǎn)品外觀呈淡黃色，色素雜質(zhì)(以A350/A280表示)低于0.010，宿主蛋白含量低于0.1ppm，殘余DNA含量每劑量(10g)低于100ng(靈敏線之下)，不含有引起抗原反應(yīng)的甘露多糖。產(chǎn)品質(zhì)量比原工藝有大幅度提高。 本文以血源白蛋白(pHSA)作為對照，對產(chǎn)品進(jìn)行了分析鑒定。結(jié)果顯示，rHSA對HSA單抗具有免疫原性，等電點(diǎn)為4.7-4.9，：HPLC純度在99﹪以上，還原與非還原電泳