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文檔簡介
1、本研究將從極度抗旱、耐鹽植物檉柳(Tamarixandrossowii)中克隆得到的泛素交聯(lián)酶基因(ubiquitinconjugatingenzymesE2s),成功構(gòu)建到植物表達載體pROKⅡ上,利用農(nóng)桿菌介導法將泛素交聯(lián)酶基因?qū)肽J街参餆煵莼蚪M中,通過對轉(zhuǎn)基因煙草的鹽、旱脅迫試驗,對泛素交聯(lián)酶基因進行功能驗證。 對煙草進行遺傳轉(zhuǎn)化,共獲得68株卡那霉素抗性芽,從中選出長勢最優(yōu)的15個株系,進行PCR檢測,結(jié)果均為陽性;
2、從15個株系中隨機對6個株系進行PCR-Southem雜交,各轉(zhuǎn)基因株系均出現(xiàn)雜交譜帶,證明泛素交聯(lián)酶基因已整合到煙草基因組中;進一步對6個株系進行RT-PCR和實時熒光定量RT-PCR檢測,結(jié)果表明外源基因能夠表達,但各株系外源基因的表達水平不盡相同,表達量最高的為TL3和TL1,TL10和TL11次之、最低的為TL5和TL7。 分別對6個轉(zhuǎn)基因株系進行了NaCl脅迫和干旱脅迫試驗,分析逆境脅迫條件下轉(zhuǎn)基因煙草與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ諢?/p>
3、草的丙二醛(MDA)含量、相對電導率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、葉綠素含量、相對生長量、生根率等指標的變化,結(jié)果表明,不同濃度NaCl脅迫處理后,各株系的相對電導率、MDA含量都逐漸增大,在NaCl濃度為440mmol.L-1時,各轉(zhuǎn)基因株系相對電導率平均值低于對照煙草的27.1%,MDA平均含量低于對照的22.6%;NaCl脅迫下,各轉(zhuǎn)基因株系SOD平均活性最低的TL5也高于對照煙草的47.5%,葉綠素平均含量最高的TL10高于對
4、照煙草的64.4%,最低TL3也高于對照煙草的29.7%;當NaCl濃度220mmol.L-1時對照煙草生根率只有30%,而轉(zhuǎn)基因煙草生根率保持在50~70%,綜上說明,鹽脅迫條件下,轉(zhuǎn)基因煙草受害程度明顯小于對照。 干旱脅迫處理10d時,轉(zhuǎn)基因煙草相對電導率平均值低于對照煙草的19.6%;對照煙草MDA含量為7.7umol.g-1,而轉(zhuǎn)基因煙草MDA含量大多在4.9~6.3μmol.g-1左右,低于對照煙草;此時轉(zhuǎn)基因煙草的葉
5、綠素平均含量為1.01mg.g-1,高于對照的64.5%,而SOD平均活性高于對照的32.3%;對轉(zhuǎn)基因株系干旱脅迫10d時相對生長量進行調(diào)查,各轉(zhuǎn)基因株系相對生長量在59%~83%范圍之間,而對照株系的相對生長量為29.7%,說明泛素交聯(lián)酶基因的導入提高了煙草的抗旱能力。 綜合以上結(jié)果,泛素交聯(lián)酶基因的組成型表達能夠不同程度提高轉(zhuǎn)基因煙草逆境脅迫下細胞膜穩(wěn)定性、SOD活性、葉綠素含量及相對生長量,說明泛素交聯(lián)酶基因具有提高植物
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