降脂類中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法與研究.pdf

1、近年來,臨床藥理研究證明,許多中藥材如決明子、大黃、何首烏、澤瀉、銀杏葉等都具有降低血脂的功能。利用這些中藥材所制成的復(fù)方制劑在臨床上也得到了廣泛的應(yīng)用。降脂類中藥復(fù)方制劑是基于天然中藥材及中醫(yī)理論研究開發(fā)出的藥品,它不僅能明顯降低血清中膽固醇、甘油三酯的含量,還能大大降低冠心病和腦血管病的發(fā)生率及死亡率,提高機體抗氧化等能力。在臨床上,治療心腦血管疾病的西藥一般采用他汀類、煙酸類、苯氧酸類、多烯脂肪酸類等治療,雖然療效確切,但經(jīng)常會引

2、起頭痛、眩暈、惡心、腹瀉、腹脹、皮疹等不良反應(yīng)。與西藥相比中藥制劑的降脂作用雖然緩慢,但安全系數(shù)高,功效全面、療效確切,無明顯的毒副作用。研究還證實,降脂類中藥制劑除有降脂作用外,還能減緩或終止動脈粥樣硬化的過程,經(jīng)長期服用可取得良好的治療效果。
　　 為了使降脂中藥復(fù)方制劑得到安全、廣泛的應(yīng)用,對其指標成分的質(zhì)量控制就成為我們研究的主要對象。藥品質(zhì)量的可控性是藥品的基本屬性,是藥品的安全性和有效性的基礎(chǔ)。質(zhì)量標準是控制藥品質(zhì)量

3、的重要手段,能有效的控制藥品的質(zhì)量,確保用藥的安全,是質(zhì)量可控性的具體體現(xiàn)。本課題選用降脂寧顆粒、脂降寧片、消渴靈片中的指標成分作為研究對象,采用反相高效液相色譜法和高效毛細管電泳法對復(fù)方制劑中指標成分的質(zhì)量控制進行較為系統(tǒng)的方法學(xué)研究。所建立的方法專屬性強、精密度和穩(wěn)定性良好,實驗結(jié)果準確可靠,可為降脂中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)、有效的試驗方法與依據(jù)。
　　 第一部分：反相高效液相色譜法測定降脂寧顆粒中二苯乙烯苷、橙黃決明

4、素、大黃素和大黃素甲醚的含量
　　 目的:建立反相高效液相色譜法同時測定降脂寧顆粒中二苯乙烯苷、橙黃決明素、大黃素和大黃素甲醚的含量測定方法,為降脂寧顆粒的質(zhì)量控制提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 1：提取方法:選用不同提取溶劑和不同提取時間來提高降脂寧顆粒指標成分的提取效率的方法。
　　 2：反相高效液相色潛法的優(yōu)化條件:選擇合適的流動相緩沖系統(tǒng),調(diào)整流動相的組成、配比、流速以及柱溫,在最大吸收波長下測定

5、,使指標峰與其它峰得到完全分離。
　　 3：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在確定的提取方法和色譜條件下,考察4種被測組分的分離度、理論塔板數(shù)、對稱因子等是否符合要求。
　　 4：方法學(xué)的考察:標準曲線的繪制、最低檢測限試驗、精密度試驗、重復(fù)性試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗。
　　 5：樣品含量測定:取4批降脂寧顆粒樣品制備成供試品溶液,測定各批樣品中四種指標成分的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1：提取方法:以75％

6、甲醇為提取溶劑,30 min為最佳超聲時間來制備供試品溶液,使各組分的提取率達到最大。
　　 2：反相高效液相色潛法的條件:采用DiamonsilTM C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱;0.1％磷酸溶液(A)-甲醇(D)作為流動相;洗脫條件:0～5 min75％A,5～15 min60％A,15～25 min50％A.,25～30 min20％A,30～40 min10％A;流速為1.0 mL/min;檢測波長

7、是286 nm;柱溫25℃;進樣量20μL。
　　 3：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:二苯乙烯苷、橙黃決明素、大黃素和大黃素甲醚峰形良好,無其它峰干擾,其理論塔板數(shù)均大于5000,與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。
　　 4：方法學(xué)的考察:二苯乙烯苷、橙黃決明素、大黃素和大黃素甲醚分別在0.580～4.06μg、0.219～1.32μg、0.0540～43.324μg、0.186～1.12μg,范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,回歸方程分別為:

8、A=2.06×103c-5.60(r=0.9998)、A=1.36x103c-5.49(r=0.9998)、A=7.24×102c-2.27(r=0.9995)、A=8.53×103c-20.5(r=0.9997);該方法精密度試驗的RSD值分別為0.94％、1.8％、1.7％、1.9％;重復(fù)性試驗的RSD值分別為1.3％、1.2％、0.76％、2.0％;12小時內(nèi)穩(wěn)定性的RSD分別為1.9％、2.7％、1.4％、2.6％;平均回收率分

9、別為96.2％、96.1％、96.6％、97.7％,RSD分別為0.74％、1.0％、3.1％、2.6％(n=5)。
　　 5：含量測定:在所建立的色譜條件下,對不同批次的降脂寧顆粒中四種指標成分的含量進行同時測定,再用外標法計算樣品各成分的含量。
　　 結(jié)論:該方法準確、方便、靈敏度高、穩(wěn)定性好,可作為降脂寧顆粒中二苯乙烯苷、橙黃決明素、大黃素和大黃素甲醚的含量測定方法。該方法也為降脂寧顆粒的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

10、>　　 第二部分：脂降寧片中丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素的HPLC法測定
　　 目的:建立了HPLC法同時測定脂降寧片中的五種指標成分-丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素。為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。
　　 方法:
　　 1：提取方法:對供試品溶液進行回流提取和超聲提取,并對這兩種提取方法進行比較,選擇提取效率較高的方法。
　　 2：反相高效液相色潛法的優(yōu)化條件:選用合適的

11、色譜柱及檢測波長,調(diào)整流動相的組成、配比、以及流速和柱溫。
　　 3：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在已確定的提取方法和色譜條件下,考察5種被測組分的分離度、理論塔板數(shù)、對稱因子等是否符合要求。
　　 4：方法學(xué)的考察:制作標準曲線、最低檢測限試驗、精密度試驗、重復(fù)性試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗。
　　 5：含量測定:取不同批次的脂降寧片,測定各批次中五種指標成分的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1:提取方法:以7

12、5％甲醇為提取溶劑,30 min為最佳超聲時間來制備供試品溶液,可使各組分的提取率達到最大。
　　 2:色潛條件的優(yōu)化:采用Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱;以0.1％磷酸溶液-甲醇-乙腈為流動相,梯度洗脫,檢測波長是286 nm;柱溫25℃;進樣量為10μL。
　　 3:系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素峰形良好,無其它峰干擾,其理論塔板數(shù)均大于5000,

13、與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。
　　 4:方法學(xué)驗證:丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素分別在4.93～1.58×102μg/mL、1.39～4.44×102μg/mL、8.08～2.59×102μg/mL、4.53～1.45×102μg/mL和1.10～3.52×102μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程分別為:A=7.01×102c-0.310(r=0.9998)、A=4.29x103c+0.0725(

14、r=0.9997)、A=3.11×103C+0.760(r=0.9998)、A=1.74×x103c-1.43(r=0.9997)、A=44.02x103c-1.11(r=0.9996);該方法精密度試驗的RSD值分別為0.41％、0.74％、0.66％、0.83％和1.3％;重復(fù)性試驗的RSD值分別為O.56％、0.71％、0.96％、1.2％和1.9％;12小時內(nèi)穩(wěn)定性的RSD分別為1.1％、1.8％、0.95％、1.6％和2.1％

15、;平均回收率分別為96.5％、98.2％、97.2％、95.9％和96.0％,RSD分別為0.94％、1.6％、0.68％、2.O％和0.72％(n=5)。
　　 5:含量測定:對不同批次的脂降寧片中五種指標成分的含量進行測定之后,再用外標法計算各樣品指標成分的含量。
　　 結(jié)論:
　　 本文建立了反相高效液相色潛法測定脂降寧片中丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素的含量測定方法。該方法準確、方便、靈敏

16、度高為脂降寧片的質(zhì)量控制提供了依據(jù),為保證中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量提供良好的質(zhì)控方法。
　　 第三部分:膠束電動毛細管電泳法同時測定脂降寧片中葛根素、丹酚酸B和丹參素的含量
　　 目的:建立可以同時測定脂降寧片中葛根素、丹酚酸B和丹參素的含量的膠束電動毛細管電泳法。
　　 方法:
　　 1:提取條件:采用回流提取和超聲提取兩種方法,比較樣品中指標成分的含量,選擇提取率較高的方法。
　　 2:電泳條件:采

17、用未涂層石英毛細管(50.2 cm×75μm×40 cm)為分離柱,80 mmoL/L磷酸二氫鈉-8 mmoL/L-十二烷基硫酸鈉(SDS)-10％乙腈(pH為6.30)為運行緩沖液,重力進樣5 s(0.5 Psi),在分離電壓20 kV、溫度22℃、紫外檢測波長為214 nm時,對脂降寧片中葛根素、丹酚酸B和丹參素進行分離測定,同時考察影響各組分分離效果的因素。
　　 3:系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在己確定的提取方法和電泳條件下,考察被

18、測組分的分離度和遷移時間等。
　　 4:方法學(xué)的考察:制作標準曲線、最低檢測限試驗、精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗。
　　 5:含量測定:取三批次的脂降寧片制備成供試品溶液,測定其三種指標成分的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1：本試驗建立了膠束電動毛細管電泳法同時測定脂降寧片中葛根素、丹酚酸B和丹參素的方法。三種組分能在20 min內(nèi)全部實現(xiàn)基線分離。
　　 2：三組分分別在18.0～2.89x

19、102μg/mL、3.23～51.7μg/mL、19.7～3.14×102μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,線性方程分別為:A=6.18×105c+56.8(r=0.9999)、A=1.19×106c+49.0(r=1.000)、A=9.21×105c-75.2(r=0.9999);精密度試驗的RSD值為2.3％、1.4％、3.2％;穩(wěn)定性試驗的RSD為1.2％、2.6％、2.5％;樣品的平均回收率為97.5％、97.8％、

20、97.1％,RSD值分別為1.5％、2.2％、1.9％。
　　 結(jié)論:
　　 該方法簡單、快速、回收率高、試驗成本低,為脂降寧片的質(zhì)量控制提供了有力依據(jù),同時也為中藥復(fù)方制劑的毛細管電泳測定提供了參考。
　　 第四部分:反相高效液相色譜法測定消渴靈片中鹽酸小檗堿的含量
　　 目的:采用反相高效液相色譜法測定消渴靈片中鹽酸小檗堿的含量方法。
　　 1：提取方法:以75％甲醇為提取溶劑,25 min為

21、最佳超聲時間來制備供試品溶液,使鹽酸小檗堿的提取效率達到最高。
　　 2：色譜條件的優(yōu)化:采用DiamonsilTM C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱;以0.1％磷酸(A)-甲醇(B)為流動相,梯度洗脫條件為0～10 min90％A,10～25 min70％A,25～40 min40％A,40～45 min10％A:檢測波長是265 nm;柱溫25℃;進樣量為10μL。
　　 3：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在已確

22、定的提取方法和色譜條件下,考察被測組分的分離度、理論塔板數(shù)、對稱因子等是否符合要求。
　　 4：方法學(xué)的考察:制作標準曲線、最低檢測限試驗、精密度試驗、重復(fù)性試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗。(5)含量測定:取三批次的消渴靈片制備供試品溶液,測定鹽酸小檗堿的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:鹽酸小檗堿的峰形良好,無其它干擾峰,其理論塔板數(shù)大于10000,與相鄰色譜峰的分離度大于1.5。
　　 2

23、：方法學(xué)的考察:鹽酸小檗堿在0.0268～0.429 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程為:A=9.70×103c+3.14(r=0.9999);該方法精密度試驗的RSD值為0.76％;重復(fù)性試驗的RSD值為0.38％;24小時內(nèi)穩(wěn)定性的RSD為O.62％;平均回收率為98.2％,RSD為1.4％(n=5)。
　　 3：含量測定:三批次中鹽酸小檗堿的平均含量分別為4.78 mg/g、4.47mg/g、4.86 mg/g。