中藥有效成分鬼臼毒素提制分析及其質(zhì)量控制新方法研究.pdf

1、中藥是中華民族的瑰寶,至今已有五千多年的歷史,它在人們的治病防病、滋補(bǔ)保健等方面發(fā)揮著重要作用。但中藥有效成分的提制分析和質(zhì)量控制一直是其發(fā)展中的瓶頸。因此,建立簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確度和靈敏度高的中藥活性成分提制分析和質(zhì)量監(jiān)控新方法對(duì)其藥理研究、臨床應(yīng)用和國(guó)際化發(fā)展有著重要意義。
　　 八角蓮、桃兒七和山荷葉是傳統(tǒng)鬼臼類中藥,具有清熱解毒、消炎鎮(zhèn)痛、化痰散結(jié)、祛瘀消腫之功效。其根中含有的鬼臼毒素不僅是治療尖銳濕疣的良好藥物,亦是合成

2、多種癌癥藥物的前體物質(zhì),在醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本文以中藥活性成分鬼臼毒素為研究對(duì)象,以現(xiàn)代新興樣品預(yù)處理技術(shù)為工具,從鬼臼藥材中對(duì)其進(jìn)行提取,并對(duì)鬼臼毒素的選擇性分離提取方法進(jìn)行了相關(guān)研究,同時(shí)建立了八角蓮藥材二維指紋圖譜質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),以期為中藥樣品前處理及其質(zhì)量控制提供參考。具體內(nèi)容如下:
　　 1.中藥活性成分鬼臼毒素的提制分析
　　 研究建立了一種膠束介導(dǎo)提取技術(shù),即離子液體(ILs)—微波輔助提取法(MA

3、E),對(duì)八角蓮、桃兒七和山荷葉中的活性成分鬼臼毒素進(jìn)行提取。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝參數(shù),三種藥材中鬼臼毒素提取率最高值分別為96.8％,89.1％和82.4％。將所擬提取方法與ILs-超聲輔助提取、ILs-室溫冷浸提取和ILs-加熱提取法進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)ILs-MAE的提取時(shí)間最短,提取得率最高。采用反相高效液相色譜法測(cè)定鬼臼毒素含量,分析準(zhǔn)確、快速。鬼臼毒素線性范圍在0.005-0.4 mg/mL(r=0.9993～0.9

4、996),檢測(cè)限為2.05～2.58μg/mL,樣品的平均回收率在97.1～102％之間,RSDs均低于3.0％。方法學(xué)考察結(jié)果表明儀器精密度和方法重現(xiàn)性良好。采用動(dòng)力學(xué)曲線、電鏡掃描及紅外光譜技術(shù)對(duì)中藥提取前后殘?jiān)谋砻嫖⒂^結(jié)構(gòu)和成分進(jìn)行研究,初步探討ILs-MAE的提取機(jī)理。最后將所擬方法用于實(shí)際鬼臼生藥材分析,因產(chǎn)地不同,藥材中鬼臼毒素的含量差異顯著。
　　 2.分子印跡固相萃取法選擇性提取分離復(fù)雜中藥中活性成分鬼臼毒素<

5、br>　　 將微波加熱沉淀聚合法用于合成鬼臼毒素分子印跡聚合物,系統(tǒng)優(yōu)化了各合成工藝參數(shù)。結(jié)果表明,以丙烯酰胺為功能單體,乙二醇二甲基丙烯酸酯和二乙烯基苯為共交聯(lián)劑,乙腈為致孔劑,按模板分子、功能單體和交聯(lián)劑的摩爾比為1∶6∶40,在偶氮二異丁腈濃度為0.01 mol/L,聚合溫度為60℃的條件下微波加熱聚合150 min所制備的印跡聚合物識(shí)別性能最好。采用光譜分析、平衡吸附實(shí)驗(yàn)、競(jìng)爭(zhēng)性吸附實(shí)驗(yàn)以及Scatchard分析等多種分析手段

6、,結(jié)合紅外、電鏡掃描和熱分析等表征方法以及高效液相色譜的檢測(cè)技術(shù),對(duì)聚合物的識(shí)別機(jī)理、形貌和吸附性能進(jìn)行了研究。將分子印跡聚合物作為固相萃取柱的吸附劑,用于實(shí)際樣品中鬼臼毒素分離富集。研究表明:該分子印跡固相萃取柱對(duì)鬼臼毒素兩種結(jié)構(gòu)類似物的選擇性識(shí)別因子分別為16.93和5.60。八角蓮、桃兒七和山荷葉中鬼臼毒素的檢測(cè)限分別達(dá)到0.15,0.12和0.18μg/mL,回收率分別為91.1％,89.5％,90.6％(n=3),結(jié)果滿意。為

7、從中藥中高效分離富集鬼臼毒素提供了一種新途徑。
　　 3.中藥八角蓮二維指紋圖譜的創(chuàng)建
　　 建立了包含色譜和光譜信息的八角蓮二維指紋圖譜。與固定波長(zhǎng)檢測(cè)的一維指紋圖譜相比,二維指紋圖譜數(shù)據(jù)信息量更大,更能全面客觀地控制藥材質(zhì)量。利用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》對(duì)10批次藥材色譜圖與共有模式指紋圖譜進(jìn)行評(píng)價(jià),相似度結(jié)果將不同來(lái)源的藥材樣品分為三組,分別為0.9674-0.9814,0.8725-0.8878和0.5