脫氧鬼臼毒素生物活性及機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分：脫氧鬼臼毒素殺蟲活性及對(duì)幾種酶系的影響 采用藥膜法、小葉碟添加法，分別研究了脫氧鬼臼毒素對(duì)美洲大蠊Periplaneta americana初孵若蟲、3 齡菜青蟲Pieris rapae L.的生物活性；采用酶促反應(yīng)，離體和在體測(cè)定了脫氧鬼臼毒素對(duì)美洲大蠊成蟲、3齡菜青蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶(AChE)和腺苷三磷酸酶(ATPase)活性的影響。脫氧鬼臼毒素對(duì)美洲大蠊初孵若蟲的殺蟲活性表現(xiàn)出濃度、時(shí)間依賴性，24、48、72

2、和96 h的LC<,50>分別為26.26>4.68>1.51>0.62 μg/cm<'2>；對(duì)3齡菜青蟲48、72和96 h的LC<,50>分別為151.87>39.99>10.60 mg/L；脫氧鬼臼毒素在1～625μmol/L范圍內(nèi)對(duì)AChE活性無影響；對(duì)美洲大蠊Na<'+>-K<'+>-ATPase離體活性有明顯抑制作用，并存在濃度.效應(yīng)關(guān)系，IC<,50>為44.9 μmol/L；對(duì)3齡菜青蟲Na<'+>-K<'+>-ATPa

3、se、Ca<'2+>-Mg<'2+>-ATPase的在體活性和美洲大蠊Ca<'2+>-Mg<'2+>-ATPase離體活性，表現(xiàn)出低劑量激活，高劑量抑制的現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)果提示，脫氧鬼臼毒素對(duì)美洲大蠊初孵若蟲、3齡菜青蟲具有較強(qiáng)的毒殺活性；美洲大蠊、菜青蟲AChE不是脫氧鬼臼毒素靶標(biāo)；ATPase可能是脫氧鬼臼毒素的重要靶標(biāo)之一。 第二部分：脫氧魔臼毒素對(duì)斑馬魚毒性作用及機(jī)制的研究 采用靜態(tài)魚類急性毒性試驗(yàn)法測(cè)定了脫氧鬼臼毒

4、素和鬼臼毒素對(duì)斑馬魚的毒性，以氰戊菊酯作對(duì)照；參照脫氧鬼臼毒素96h LC<,50>設(shè)定4個(gè)濃度梯度處理斑馬魚，48h后測(cè)定斑馬魚肌肉組織ATPase、 CAT和SOD的活性。脫氧鬼臼毒素、鬼臼毒素和氰戊菊酯對(duì)斑馬魚的96 h LC<,50>值分別為3.49、3.70和0.00775 mg/L，安全濃度分別為0.36、1.61和0.000803 mg/L。脫氧鬼臼毒素在0.5～4 mg/L濃度范圍對(duì)總ATP、Na<'+>-K<'+>-A

5、TPase和Ca<'2+>-ATPase的作用趨勢(shì)基本一致，表現(xiàn)為1～2 mgm激活，高濃度抑制作用。4 mgm能抑制總ATPase、Na<'+>-K<'+>-ATPase和Ca<'2+>-ATPase活性，抑制率分別為24.4％、12.3％和33.8％。脫氧鬼臼毒素在0.5 mg/L時(shí)，能抑制SOD的活性，而對(duì)CAT活性沒有作用。1、2 mg/L組對(duì)兩種酶活性均表現(xiàn)出激活作用，4 mg/L時(shí)，SOD和CAT均被抑制，抑制率分別為34.

6、1％和31.9％。試驗(yàn)結(jié)果提示，脫氧鬼臼毒素和鬼臼毒素的毒性為中毒；斑馬魚的ATPase、 CAT和SOD可能是脫氧鬼臼毒素的作用靶標(biāo)之一。 第三部分：脫氧鬼臼毒素對(duì)大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元鈣穩(wěn)態(tài)的影響 采用激光共聚焦顯微鏡、酶促反應(yīng)技術(shù)測(cè)定脫氧鬼臼毒素對(duì)大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子濃度、AChE和ATPase活性的影響。外液有鈣時(shí)，脫氧鬼臼毒素能誘導(dǎo)[Ca<'2+>]<,i>升高，并有明顯的濃度-效應(yīng)關(guān)系，EC<,50>

7、為22.2μmol/L。外液無鈣時(shí)，脫氧鬼臼毒素也能快速誘導(dǎo)[Ca<'2+>]<,i>升高，但沒有濃度-效應(yīng)關(guān)系。在1～625μmol/L范圍內(nèi)對(duì)大鼠DRG神經(jīng)元AChE活性沒有影響。脫氧鬼臼毒素對(duì)Na<'+>-K<'+>-ATPase和Ca<'2+>-ATPase均為抑制作用，無劑量反應(yīng)關(guān)系。試驗(yàn)結(jié)果提示：DRG神經(jīng)元AChE不是脫氧鬼臼毒素作用靶標(biāo)；脫氧鬼臼毒素誘導(dǎo)DRG神經(jīng)元[Ca<'2+>]<,i>升高；[Ca<'2+>]<,i