作為腫瘤自殺基因載體的嬰兒雙歧桿菌安全性試驗.pdf

1、目的：觀察作為腫瘤自殺基因載體的嬰兒雙歧桿菌經(jīng)腹腔注射(i.p)和尾靜脈注射(i.v)途徑的急性毒性實驗及尾靜脈注射(i.v)亞慢性安全性評價。 方法：以6-8周齡健康BALB/c小鼠為對象，將嬰兒雙歧桿菌受試菌液按i.p(腹腔注射)和i.v(尾靜脈注射)方式進行急性毒理學試驗：每種給藥方法分5個劑量組，小鼠10只/組，雌雄各半，按實際體重調整劑量，一次注射，注射容積i.p為1.0ml/20g和i.V為0.5ml/20g(LD5

2、0)、0.2 ml/20g(IDSO)，注射后嚴密觀察2h，連續(xù)觀察7天動物癥狀及死亡情況；用Bliss法測小鼠i.p和i.v途徑受試物的半數(shù)致死量(LDSO)和95％可信限以及半數(shù)感染量(ID50)和95％可信限。根據(jù)得到的結果，進行亞慢性安全性實驗，設置1/10 LD50組、1/50 LD50組、1/100 LD50組為實驗組，生理鹽水(0.9％NS)為陰性對照，i.v方式，注射容積0.2ml/20g，小鼠20只/組，按實際體重調整

3、劑量，注射后嚴密觀察2h；每天定時給予受試物一次，每兩天測一次體重，16天后處死，測定血常規(guī)、血生化、臟器系數(shù)、脾指數(shù)，解剖后對重要臟器大體觀察及組織病理學檢查。并比較各組計量資料的統(tǒng)計學差異。 結果：1)i.p途徑測得受試物LD50和95％為5.0467×1013 cfu/kg(4.2603-6.1165×1013cfu/kg)；2)i.v途徑測得受試物LD50和95％為1.8383×1013cfu/kg(1.6403-2.0

4、583×1013cfu/kg)；3)i.p途徑測得受試物ID50和95％為1.2874×1013cfu/kg(0.98694-1.6762×1013cfu/kg；4)i.v途徑測得受試物ID50和95％為0.98615×1013cfu/kg(0.84472-1.1611×1013cfu/kg)。5)嬰兒雙歧桿菌尾靜脈注射途徑對BALB/c小鼠亞慢性毒性實驗，未觀察到有害作用的劑量(NOAEL)為1/100LD50組劑量，1.8383×1

5、011fu/kg，觀察到有害作用的最低劑量(LOAEL)為1/100LD50組劑量，3.6766×1011cfu/kg。其靶器官主要為血液系統(tǒng)、肝臟。它對脾臟有刺激作用，測定脾指數(shù)為，1/10LD50組=3.317，1/50LD50組=2.307，1/100LD50組=1.683。 結論：作為基因載體的雙歧桿菌菌株毒性極低，造成急性毒性反應(單次注射實驗)的劑量均遠高于實驗常用劑量。嬰兒雙歧桿菌對BALB/c小鼠尾靜脈注射(i.