雙歧桿菌脂磷壁酸抗體的制備及其在雙歧制品中的檢測應(yīng)用.pdf

1、目的：制備雙歧桿菌脂磷壁酸抗體，運(yùn)用血清學(xué)方法初步探討雙歧制品中脂磷壁酸和雙歧桿菌活菌的含量檢測，為后者建立一種快速經(jīng)濟(jì)簡單易行的可靠方法。 方法：預(yù)先培養(yǎng)足夠量的兩歧雙歧桿菌（Bifidobacterium bifidum，編號：86321），用非離子型去垢劑Triton x-114提取兩歧雙歧桿菌的脂磷壁酸，加甲基化牛血清白蛋白與佐劑超聲乳化，首劑免疫為完全佐劑，之后都用不完全佐劑。BALB/C小鼠隨機(jī)分為高中低三個劑量組。

2、先用卡介苗50μg/只注射小鼠進(jìn)行多克隆激活，一周后第一次注射抗原，間隔兩周再注射一次，再隔一周第三次注射抗原。高中低組劑量分別為每只150μg，100μg，50μg。第一次抗原免疫之后每隔一周采血一次，間接ELISA法檢測抗體效價與特異性，觀察同兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌的反應(yīng)性。用免疫血清經(jīng)雙抗體夾心ELISA法和免疫結(jié)合微量培養(yǎng)的方法分別檢測市售某品牌酸奶中脂磷壁酸和雙

3、歧桿菌活菌量 結(jié)果：小鼠在一周后有微量抗體產(chǎn)生，各組差別不大，但免疫時間越久，這種差別越大，總體來說抗原劑量越大，抗體效價越高，中高劑量組差別不明顯，免疫血清最高效價可達(dá)1：1280，與兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌免疫反應(yīng)都是強(qiáng)陽性，但與嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌皆為陰性。抗-mBSA最高血清效價為1：0～16，可以忽略。小鼠在高劑量組出現(xiàn)急性變態(tài)反應(yīng)，一般在30 min內(nèi)發(fā)作、出現(xiàn)抽搐、呼吸困難

4、、瞳孔放大變色、心跳減弱甚至消失，有這些癥狀的死亡率很高，未死亡者2～6 h恢復(fù)生命體癥。其他組沒有出現(xiàn)過敏反應(yīng)。對于酸奶中脂磷壁酸和雙歧桿菌活菌的含量檢測取得良好結(jié)果，活菌數(shù)值低于平板計數(shù)法結(jié)果，但相差不大。檢測線可達(dá)105cfu/ml。 結(jié)論：純化的LTA沒有免疫原性，但為一種很強(qiáng)的菌體抗原成份，加載體與佐劑能產(chǎn)生高效價抗體。該抗體是針對雙歧桿菌細(xì)胞膜上LTA的雙歧桿菌屬特異性抗體，可用于檢測存在于人和動物體內(nèi)的雙歧桿菌，與