多抗逆性嬰兒雙歧桿菌優(yōu)良菌株的選育及其微膠囊化研究.pdf

1、雙歧桿菌是人體腸道內(nèi)有益菌群之一,對人體健康發(fā)揮著重要作用,目前已被廣泛應用于食品工業(yè)中。近幾年來世界發(fā)達國家在這方面做了大量的研究,但我國對于雙歧桿菌制品的開發(fā)還很落后,主要是因為雙歧桿菌增殖培養(yǎng)過程對條件要求比較苛刻。目前對其開發(fā)主要存在活菌數(shù)量低、保藏期短等技術(shù)質(zhì)量問題。
　　 本文以嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)為原料,對其進行復合誘變,利用三層包埋法將突變株進行微膠囊化,并優(yōu)化了其生長

2、培養(yǎng)基。目的在于選育出高產(chǎn),多抗性的嬰兒雙歧桿菌,本試驗內(nèi)容與結(jié)果如下:
　　 (1)以嬰兒雙歧桿菌為初發(fā)菌株,對其進行耐酸、耐膽鹽、耐抗生素等抗性試驗,初發(fā)菌株的極限耐受pH值為5.0,可耐受膽鹽濃度2％,在抗生素環(huán)境下菌株不生長繁殖。采用紫外線硫酸二乙酯復合誘變法對初發(fā)菌株進行誘變選育,篩選到了突變株Bi-A54,該突變株的極限耐受pH值為3.8,在膽鹽濃度2.4％,抗生素氨芐青霉素濃度不大于0.6mg/mL的培養(yǎng)基中可穩(wěn)定

3、生長。突變株的菌落、菌體形態(tài)與初發(fā)菌株完全一致,經(jīng)鑒定是嬰兒雙歧桿菌的變異菌株。對突變株進行生理生化試驗,發(fā)現(xiàn)突變株可利用阿拉伯糖。
　　 (2)通過單因素試驗確定了突變株的最佳生長繁殖條件:最佳培養(yǎng)溫度為37℃,最佳接種量為3％,最適初始pH值為6.4。對突變株Bi-A54進行培養(yǎng)基優(yōu)化試驗,經(jīng)過正交試驗得到優(yōu)化培養(yǎng)基的最佳配比為:大豆蛋白胨1.1％、酵母膏0.5％、大豆低聚糖1.3％、葡萄糖0.6％、番茄汁8.0％,胡蘿卜汁

4、7.0％。優(yōu)化培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到的突變株活菌數(shù)為2.68×109cfu/mL,比基礎(chǔ)培養(yǎng)基中活菌數(shù)7.62×108cfu/mL提高了一個數(shù)量級,是其3.5倍。菌液的滴定酸度由115.69°T,增加到156.01°T。
　　 (3)通過正交試驗得到凍干保護劑的最佳配比:海藻糖12％、甘油4％、明膠0.5％、維生素C0.5％。在添加了優(yōu)化保護劑的情況下,經(jīng)冷凍干燥后的突變株存活率為70.32％。經(jīng)過兩次凍干和三次微膠囊化試驗,測得微膠

5、囊中活菌總數(shù)達到2.53×1010cfu/g,最初的活菌數(shù)為3.64×1010 cfu/g,未經(jīng)過微膠囊化的凍干菌粉活菌數(shù)為1.27×1010 cfu/g。經(jīng)過微膠囊化的菌株存活率為69.51％,未經(jīng)微膠囊化的凍干菌粉中菌株存活率為34.90％。該試驗大大提高了菌株在生產(chǎn)過程中的存活率,對生產(chǎn)有著實際意義。通過單因素試驗確定了優(yōu)化菌泥與保護劑的最佳配比3:1,優(yōu)化保護劑的最佳pH值6.5,以及菌泥與優(yōu)化保護劑的最佳震蕩混合時間30min