鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯對(duì)原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元的毒性研究.pdf

1、2011年5月臺(tái)灣地區(qū)發(fā)生“塑化劑”事件,這一事件的元兇——鄰苯二甲酸(2—乙基己基)酯(DEHP)得到了全社會(huì)空前的關(guān)注.DEHP在工業(yè)上有廣泛的應(yīng)用,常用來增強(qiáng)塑料的可塑性,主要用在聚氯乙烯(PVC)塑料制品中,在保鮮膜、食品包裝材料、玩具以及醫(yī)療器械用品中均有應(yīng)用.在這次事件中DEHP被不法商家用在食品飲料中以代替食品添加劑“起云劑”,這是近年來臺(tái)灣最嚴(yán)重的食品安全事件.此外,對(duì)于添加了DEHP的PVC塑料制品做成的食品包裝材料,

2、DEHP也可能從食品包裝材料中遷移到食品或水中.
　　人們對(duì)于DEHP對(duì)動(dòng)物和人體的毒性已經(jīng)有廣泛的研究,除了DEHP對(duì)生殖和發(fā)育系統(tǒng)的影響以外,也有大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 DEHP可通過氧化損傷對(duì)不同種系的體外培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用.細(xì)胞的氧化損傷是氧化和抗氧化作用失衡的結(jié)果,氧化損傷是引起組織和細(xì)胞凋亡的一個(gè)重要機(jī)制.
　　人體腦組織中含有的與氧化有關(guān)的物質(zhì)水平較高,同時(shí)腦內(nèi)抗氧化酶及非酶的自由基清除劑含量很低,使得腦組織極容

3、易受到自由基損傷,腦內(nèi)神經(jīng)元的死亡與多種神經(jīng)退行性疾病有關(guān).大腦海馬是學(xué)習(xí)和記憶的主要場所,海馬神經(jīng)元的損傷與阿爾茨海默病(Alzheimer‘s disease，AD)有密切關(guān)系.本論文重點(diǎn)研究DEHP對(duì)體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的毒性作用,探討其對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響.
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?從細(xì)胞水平上研究DEHP對(duì)海馬神經(jīng)元的毒性作用,從而揭示DEHP對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)可能的影響,為DEHP的安全性評(píng)價(jià)提供一定的數(shù)據(jù)支持.
　　實(shí)驗(yàn)方法

4、:采用無血清培養(yǎng)方法進(jìn)行Wistar大鼠胎鼠海馬神經(jīng)元的培養(yǎng),在倒置熒光顯微鏡下觀察海馬神經(jīng)元生長狀態(tài),及DEHP對(duì)神經(jīng)元形態(tài)的影響.根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)中DEHP對(duì)細(xì)胞起到毒性作用的濃度摸索DEHP引起海馬神經(jīng)元毒性的濃度,用MTT法研究DEHP對(duì)海馬神經(jīng)元活力的影響.通過熒光染料Hoechst33258染色觀察,及凋亡酶Caspase-3活力測定,研究海馬神經(jīng)元的凋亡.用熒光染料DCFH-DA對(duì)培養(yǎng)海馬神經(jīng)元進(jìn)行熒光染色,通過激光掃描共聚

5、焦顯微鏡分析細(xì)胞內(nèi)ROS的水平,并測定神經(jīng)元超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)的含量,探究DEHP對(duì)海馬神經(jīng)元的氧化損傷.
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與用胎牛血清培養(yǎng)的神經(jīng)元相比,無血清培養(yǎng)能得到純度較高并且生長狀態(tài)良好的神經(jīng)元.經(jīng)過濃度摸索,最終確定試驗(yàn)中采用的DEHP濃度分別為0.25mM,0.5mM,1mM,2mM,3mM.形態(tài)觀察和MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DEHP造成海馬神經(jīng)元形態(tài)的改變和細(xì)胞活力的下降,并且這一影響與DEHP