銀杏內(nèi)酯B對(duì)鋰-匹羅卡品癲癇大鼠干預(yù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的: 建立鋰-匹羅卡品癲癇（Lithium-Pilocarpine Seizures，LPS）大鼠模型，選擇癲癇大鼠行為學(xué)改變、海馬結(jié)構(gòu)病理形態(tài)學(xué)以及星形膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)性等指標(biāo)，觀察銀杏內(nèi)酯B（Ginkolide B，GB）對(duì)癲癇大鼠的干預(yù)作用，并初步探討其干預(yù)作用的機(jī)制，為拓展銀杏葉制劑的臨床應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法: 48 只健康成年雄性Sprague-Dawley 大鼠（簡(jiǎn)稱(chēng)SD 大鼠）隨機(jī)分成6組（8 只/

2、組）：①正常對(duì)照組（NC）；②鋰-匹羅卡品模型組（LPS）；③GB 低劑量組（GBL）；④GB 中劑量組（GBM）；⑤GB 高劑量組（GBH）；⑥陽(yáng)性藥物苯巴比妥對(duì)照組（Phe）。GB 在匹羅卡品前1h 腹腔注射給藥，給予匹羅卡品后觀察大鼠癲癇站立發(fā)作潛伏期、發(fā)作程度及死亡情況，24h 后灌注固定取材行HE、Nissl 染色觀察海馬組織形態(tài)學(xué)變化、神經(jīng)元數(shù)量改變，免疫組化染色分析Caspase-3 蛋白和膠質(zhì)原纖維酸性蛋白（GFAP）表

3、達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1. 行為學(xué)變化：與LPS 組相比，GB 有延長(zhǎng)癲癇大鼠站立發(fā)作潛伏期的趨勢(shì)，其中，GBH 組與Phe 組一樣可以明顯延長(zhǎng)癲癇大鼠站立發(fā)作潛伏期（P<0.05）；經(jīng)秩和檢驗(yàn)分析，GB 可以減輕癲癇發(fā)作的嚴(yán)重程度，其中，GBH 組效果最好，和Phe 組療效相近；GB 各組大鼠死亡數(shù)目減少。
　　 2. 病理形態(tài)學(xué)觀察
　　 2.1 海馬病理形態(tài)學(xué)改變：LPS 組海馬神經(jīng)元變性及

4、壞死顯著，大部分細(xì)胞核固縮、碎裂和溶解，細(xì)胞丟失明顯，殘存神經(jīng)元顯著變性、胞漿濃縮、胞漿空泡變性，部分神經(jīng)元呈現(xiàn)胞漿和胞核水腫，壞死區(qū)周?chē)行∧z質(zhì)細(xì)胞增生。與LPS 組相比，GB 各劑量組均可不同程度減輕腦組織病理改變，其中，GBL 組大鼠海馬結(jié)構(gòu)各區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞核固縮，胞漿溶解，出現(xiàn)空泡狀結(jié)構(gòu)，胞質(zhì)內(nèi)尼氏體減少；GBM 組大鼠，海馬結(jié)構(gòu)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)空泡減少，胞漿增多，胞漿內(nèi)可見(jiàn)少量尼氏體，細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)有所改善；GBH 組，細(xì)胞核大而圓染色

5、淺，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)塊狀的尼氏體，細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)趨于正常。
　　 2.2 海馬神經(jīng)元丟失情況：與NC 相比，LPS 組大鼠海馬結(jié)構(gòu)CA1 區(qū)、CA3區(qū)和齒狀回門(mén)區(qū)的神經(jīng)元數(shù)量明顯減少（P<0.05）。與LPS 組相比，GB 各劑量組和Phe 組大鼠海馬各亞區(qū)神經(jīng)元數(shù)量均有增多（P<0.05），其中，GBH 組與Phe組神經(jīng)元數(shù)目增加最明顯，兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示GBH與Phe 作用相近。海馬神經(jīng)元數(shù)目與GB 劑

6、量之間呈顯著正相關(guān)（各區(qū)相關(guān)系數(shù)分別為rs=0.784、0.837、0.813，P<0.01），表明神經(jīng)元的存活數(shù)目和GB 之間呈劑量依賴(lài)性，GB 有防止癲癇大鼠海馬神經(jīng)元丟失的作用。
　　 3. 海馬神經(jīng)元Caspase-3 蛋白表達(dá)情況免疫組化染色分析結(jié)果顯示：與NC 組相比，LPS 組大鼠海馬結(jié)構(gòu)各區(qū)Caspase-3 蛋白表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性，表現(xiàn)為Caspase-3-IR 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多（P<0.05），染色加深。與LPS

7、 組相比，GBL 組在CA1 和CA3 區(qū)Caspase-3 蛋白表達(dá)略有減少，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），GBM、GBH 及Phe 組在CA1 和CA3 區(qū)Caspase-3-IR 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均有不同程度減少（P<0.05）；GBL、GBM、GBH及Phe 組在齒狀回門(mén)區(qū)Caspase-3 蛋白表達(dá)有不同程度降低，表現(xiàn)為Caspase-3-IR陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)有不同程度減少（P<0.05）；GBH 與Phe 組在各區(qū)表達(dá)的Caspas

8、e-3-IR陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目最少，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明GBH 與Phe 作用相近；Caspase-3-IR 陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)數(shù)量與GB 劑量之間呈顯著負(fù)相關(guān)（rs=-0.542、-0.756、-0.652，P<0.01），提示GB 可抑制Caspase-3 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)，作用呈劑量依賴(lài)性。
　　 4. 海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性變化免疫組化染色分析結(jié)果顯示：與NC 組相比，LPS 組大鼠海馬結(jié)構(gòu)各區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增強(qiáng)

9、，表現(xiàn)為GFAP-IR 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增多并且濃染，細(xì)胞體積變大，突起及其分支增多、增長(zhǎng)增粗并扭曲，使細(xì)胞呈現(xiàn)典型的“星形”。與LPS 組相比，GBM、GBH 和Phe 組海馬各區(qū)GFAP-IR 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少（P<0.05），表明星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性不同程度減弱，其中，GBH 和Phe 組表達(dá)的GFAP 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目最少，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明GBH 與Phe 作用相近；海馬各區(qū)GFAP-IR 陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)數(shù)量與G

10、B 劑量之間呈顯著負(fù)相關(guān)（rs=-0.885、-0.793、-0.846，P<0.01），提示GB 對(duì)GFAP 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)的抑制作用呈劑量依賴(lài)性，GB 可以降低癲癇大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)性。
　　 結(jié)論:
　　 1. GB 能夠延長(zhǎng)LPS 癲癇大鼠站立發(fā)作潛伏期，減輕癲癇發(fā)作的嚴(yán)重程度，表明GB 對(duì)LPS 大鼠有抗癲癇作用。
　　 2. GB 抗癲癇作用可能與其改善癲癇引起的海馬病理形態(tài)學(xué)改變、減少癲癇造