IL6在急性肝損傷中的作用研究.pdf

1、目的:研究IL-6在肝大部分切除術(shù)后肝再生中的作用。
　　 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SPF級(jí)健康雄性6-8周齡C57b(1)/j6小鼠和同級(jí)別同性別、同品系和同周齡的IL-6基因敲除C57b(1)/j6小鼠，體重18-25g。隨機(jī)取5只正常小鼠作為正常組，用以測(cè)量小鼠正常肝重/體重比、各肝葉比重和肝功能正常值范圍，以及制作正常肝組織切片;隨機(jī)取正常小鼠和IL-6基因敲除小鼠各25只分別為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組小鼠分為6h、12h

2、、24h、36h及48h5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只小鼠，參照湯朝暉，吳孟超[1]、MehrdadNikfarjam[2]以及ClaudiaMitchell[3]的方法，切除小鼠肝臟左葉和中葉（約占70％），稱所切除肝葉濕重，術(shù)后采血用于檢測(cè)各組小鼠術(shù)后肝功能;殘肝稱濕重，計(jì)算肝再生率及肝臟指數(shù)，切取殘肝組織中的一葉，應(yīng)用PCR檢測(cè)cyclinD1、cyclinE1和cyclinA2的基因表達(dá)的相對(duì)水平。剩余的殘肝組織進(jìn)行切片、染色，研究

3、肝再生過程中肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，計(jì)算雙核細(xì)胞比率。
　　 結(jié)果:
　　 所有小鼠在術(shù)后半小時(shí)內(nèi)麻醉復(fù)蘇，且在處死之前無死亡。
　　 術(shù)后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)小鼠肝重/體重比隨時(shí)間推移逐漸升高;實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)小鼠肝重/體重比均小于術(shù)前正常值，有明顯差異P＜0.01;術(shù)后6h及術(shù)后12h實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間小鼠肝臟指數(shù)無明顯差異P＞0.05，術(shù)后24h、36h、48h實(shí)驗(yàn)組小于對(duì)照組，有明顯差異分別為P＜0.

4、05、P＜0.05和P＜0.01。
　　 術(shù)后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)小鼠肝再生率隨時(shí)間推移逐漸升高;術(shù)后6h、12h、24h、36h實(shí)驗(yàn)組肝再生率均低于對(duì)照組，有明顯差異分別為P＜0.05、P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01;術(shù)后48h實(shí)驗(yàn)組肝再生率均低于對(duì)照組，但兩組間無明顯差異P＞0.05。
　　 肝組織切片蘇木素-伊紅(HE)染色顯示，術(shù)前正常小鼠肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索呈放射狀排列，肝血竇清晰;實(shí)驗(yàn)組

5、和對(duì)照組術(shù)后的總體變化趨勢(shì)是細(xì)胞體積變大，組織增生，肝細(xì)胞索排列結(jié)構(gòu)紊亂，雙核細(xì)胞數(shù)目逐漸增加。
　　 肝組織切片雙核細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)照組術(shù)后12h、24h、36h、48h較術(shù)前升高明顯，有明顯差異P＜0.05，但術(shù)后6h較術(shù)前無明顯差異P＞0.05;實(shí)驗(yàn)組術(shù)后24h、36h、48h較術(shù)前升高明顯，有明顯差異P＜0.05，但術(shù)后6h和12h較術(shù)前無明顯差異P＞0.05。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，對(duì)照組術(shù)后12h、24h、36h、48h各時(shí)間

6、點(diǎn)雙核細(xì)胞計(jì)數(shù)較實(shí)驗(yàn)組雙核細(xì)胞高，有明顯差異分別為P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01和P＜0.05。術(shù)后6h兩組之間雙核細(xì)胞數(shù)目比較無明顯差異P＞0.05。
　　 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血清ALT值均于術(shù)后12h達(dá)到高峰，達(dá)峰后實(shí)驗(yàn)組ALT下降較對(duì)照組緩慢;對(duì)照組AST于術(shù)后12h達(dá)到高峰，實(shí)驗(yàn)組AST于術(shù)后24h達(dá)到高峰，且峰值較對(duì)照組高;實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)血清中AST、ALT值均較術(shù)前升高，有明顯差異P＜0.01;術(shù)后

7、36h、48h實(shí)驗(yàn)組血清中ALT含量高于對(duì)照組，有明顯差異分別為P＜0.01和P＜0.05;術(shù)后12h、24h、36h、48h實(shí)驗(yàn)組血清中AST含量高于對(duì)照組，有明顯差異分別為P＜0.05、P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05。
　　 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組術(shù)后血清中AKP、γ-GT值均于術(shù)后24h達(dá)到高峰。術(shù)后6h、12h、24h、36h、48h血清中AKP、γ-GT較術(shù)前升高，有明顯差異P＜0.05。
　　 小鼠肝部分切

8、除術(shù)后血清中GLU水平較術(shù)前下降，與術(shù)前相比較有明顯差異P＜0.05。組間比較無明顯差異。
　　 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞周期蛋白mRNA表達(dá)的比較，術(shù)后6hcyclinD1基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)組低，有明顯差異(P＜0.01)，術(shù)后24hcyclinD1基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)組低，有明顯差異(P＜0.001)，術(shù)后36h和48hcyclinD1基因表達(dá)兩組無明顯差異。
　　 cyclinE1基因表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，術(shù)后6h無明顯差異(P＞

9、0.05)，術(shù)后24hcyclinE1基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)組較低，有明顯差異(P＜0.05)，術(shù)后36h基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)組低，有明顯差異(P＜0.001)，48h兩組無顯著性差異。
　　 cyclinA2基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，術(shù)后6h基因表達(dá)無明顯差異，術(shù)后24h和36h基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)組較低，有明顯差異(P＜0.001)，術(shù)后48h基因表達(dá)無明顯差異。
　　 結(jié)論:
　　 IL-6在肝大部切除后有促進(jìn)肝臟細(xì)胞再生的作用，