低氧刺激下Egr-1對(duì)細(xì)胞微管骨架穩(wěn)定作用的研究.pdf

1、早期生長反應(yīng)基因Egr-1屬即刻早期基因家族，其編碼的蛋白產(chǎn)物是一種含鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子，能在多種刺激因子的誘導(dǎo)下快速短暫表達(dá)、與多種下游基因的啟動(dòng)子區(qū)域相結(jié)合，上調(diào)或下調(diào)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生各種生物學(xué)功能。Egr-1不僅與細(xì)胞生長有關(guān)，而且參與多種細(xì)胞的正常分化、凋亡。Egr-1在多種惡性腫瘤中表達(dá)消失，因此，它可作為某些惡性腫瘤的生物學(xué)標(biāo)記，對(duì)腫瘤的診斷及療效評(píng)估有重要意義。Egr-1作為一種早期生長反應(yīng)因子，在低氧誘導(dǎo)下有表達(dá)升高

2、的現(xiàn)象，同時(shí)與短期低氧誘導(dǎo)的代謝性應(yīng)激和細(xì)胞骨架重塑有關(guān)。本文研究旨在低氧作用TEgr-1對(duì)細(xì)胞微管骨架的保護(hù)調(diào)控。主要結(jié)果如下： 1.在有絲分裂間期A549細(xì)胞內(nèi)的Egr-1主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，可以明顯觀察到有類似于微管骨架的絲狀分布。在低氧刺激下Egr-1不入核，并伴有快速、短暫的表達(dá)上升。 2.細(xì)胞經(jīng)過低溫刺激或Nocodazole處理一段時(shí)間后，細(xì)胞微管骨架解聚。低氧處理能保護(hù)細(xì)胞微管骨架，延緩低溫刺激或Noco

3、dazole對(duì)細(xì)胞微管結(jié)構(gòu)的破壞。用RNA干擾的方法下調(diào)細(xì)胞內(nèi)源Egr-1的表達(dá)后，細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)變得異常，微管收縮彎折嚴(yán)重，無法舒展。同時(shí)，MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力顯示，Egr-1內(nèi)源表達(dá)下調(diào)后的細(xì)胞活力明顯降低60％，推測(cè)主要是由于細(xì)胞凋亡引起的。 3.有絲分裂周期中，Egr-1在A549細(xì)胞中與微管骨架存在共分布現(xiàn)象。在前期，Egr-1能夠沿著微管形成類似絲狀的結(jié)構(gòu)，中期形成紡錘體樣，并且在中心體處產(chǎn)生明顯的聚集，但不分布于星

4、體微管。進(jìn)入后期和術(shù)期，從中心體到細(xì)胞縊裂的中間體均有Egr-1分布，并在中間體處有很強(qiáng)的聚集。其中Egr-1駐留在紡錘體處及在中心體處強(qiáng)烈的分布提示Egr-1可能與細(xì)胞有絲分裂相關(guān)。另外，下調(diào)Egr-1的內(nèi)源表達(dá)，細(xì)胞有絲分裂相明顯減少，這也說明Egr-1與細(xì)胞的有絲分裂講程有關(guān)。 綜上所述，我們認(rèn)為低氧刺激是通過上調(diào)Egr-1的表達(dá)而起到重塑保護(hù)細(xì)胞微管骨架的作用。提示Egr一1與微管解聚裝配有關(guān)，而且是指導(dǎo)細(xì)胞有絲分裂的一