LXRα通過IRF3途徑負(fù)性調(diào)控LPS誘導(dǎo)的Kupffer細(xì)胞激活的機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過觀察LXRα激動(dòng)劑T0901317對LPS刺激后kupffer細(xì)胞（KCs）中IRF3及GRIP1、LXRα表達(dá)的影響，探討LXRα負(fù)性調(diào)控LPS的KCs激活所到的炎癥反應(yīng)的相關(guān)機(jī)制。 方法：采用“膠原酶原位灌注法”分離和培養(yǎng)雄性KM小鼠肝臟中的KCs，所得細(xì)胞在含20％小牛血清和1％青霉素/鏈霉素的1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將分離的KCs隨機(jī)分為4組：1.空白對照組；2.TLR4配體激活劑LPS（1ug/ml）組；3.L

2、XRα配體激動(dòng)劑T0901317（5ug/ml）組；4.LPS和T0901317聯(lián)合處理組。收集培養(yǎng)細(xì)胞，采用Western bolt法檢測KCs的LXRα、GRIP1及IRF3蛋白表達(dá)水平。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測KCs培養(yǎng)上清液中IFNβ、TNF-α和IL-1β含量。 結(jié)果：LXRα蛋白質(zhì)表達(dá)水平在T0901317處理組（0.654±0.004）最高，LPS處理組（0.008±0.003）最低。聯(lián)合處理組（0.123

3、±0.011）中，LXRα表達(dá)明顯低于LXRα激動(dòng)劑組（P<0.05），但又顯著高于其它兩組（P<0.05）。IRF3及GRIP1蛋白表達(dá)量在LPS組最高（分別為0.977±0.019，0.761±0.005），聯(lián)合處理組表達(dá)明顯降低（分別為0.908±0.011，0.710±0.003），兩組間均數(shù)差異均有顯著意義（P<0.05）；在LPS組及聯(lián)合處理組中，IRF3及GRIP1蛋白表達(dá)量均高于對照組（分別為0.719±0.064、0.

4、492±0.023）及LXRα激動(dòng)劑組（分別為0.468±0.019、0.425±0.002），差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。IFNp在LPS處理組的含量（329.5±35）較對照組（129.6±17）及LXRα激動(dòng)劑組（112.8±24）有明顯增高，具有顯著性差異（P<0.05）；聯(lián)合處理組IFNβ含量（224.4±33）比LPS處理組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；IFNβ表達(dá)LXRα激動(dòng)劑組表達(dá)最低。TNF-α在

5、LPS處理組的含量（15.45±0.59）較其它三組明顯增高，具有顯著性差異（P<0.05）；對照組（5.05±0.17）、LXR激動(dòng)劑T0901317處理組（5.67±0.25）和聯(lián)合處理組（6.62±0.38）水平較低，且他們?nèi)M之間沒有明顯差別（P>0.05）。IL-1β的表達(dá)趨勢與TNF-α相同。 結(jié)論：預(yù)防性應(yīng)用LXRα激動(dòng)劑T0901317，能明顯抑制LPS誘導(dǎo)的KCs的IRF3及GRIP1表達(dá)，通過抑制IRF3途徑