LPS通過激活TLR4誘導(dǎo)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化.pdf

1、目的：研究Toll樣受體4（TLR4）在脂多糖（LPS）誘導(dǎo)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞(HI BECs)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）中的作用及核轉(zhuǎn)錄因子Snail是否與參與該過程的調(diào)控。方法：體外培養(yǎng)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，CON+LPS組加終濃度為2ug/ml的LPS誘導(dǎo)72h，CON組不作處理作為對照。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；Real-time PC R檢測上皮標(biāo)記物E-cadherin，間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin、Vimentin，T

2、LR4、核轉(zhuǎn)錄因子Snail mRNA表達(dá)量；Western blot檢測以上各指標(biāo)蛋白表達(dá)量；Transwell細(xì)胞遷移實驗評估各組細(xì)胞移動能力。KD+LPS組構(gòu)建TLR4 siRNA慢病毒載體，采用RN A干擾技術(shù)沉默HIBECs中TLR4，NC+LPS組空白病毒轉(zhuǎn)染作為對照，轉(zhuǎn)染72h后分別予終濃度為2ug/ml的LPS誘導(dǎo)，72h后通過上述方法觀察慢病毒轉(zhuǎn)染對LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)改變，TLR4、Snail、上皮間質(zhì)標(biāo)記物基因表達(dá)

3、改變的影響。
　　結(jié)果：
　　1.LPS誘導(dǎo) HIBECs72h，CON+LPS組細(xì)胞由上皮向間葉樣細(xì)胞形態(tài)改變；與CON組相比，CON+LPS組上皮標(biāo)記物 E-cadherin mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05），間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin、Vimentin mRNA表達(dá)上調(diào)（P<0.05，P<0.05）；上述指標(biāo)蛋白水平表達(dá)趨勢與mRNA一致；兩組細(xì)胞轉(zhuǎn)移率無差異（P＞0.05）；提示：LPS可誘導(dǎo)HIBECS發(fā)生EM

4、T。
　　2.CON+LPS組TLR4 mRNA表達(dá)量高于CON組（P<0.05）；蛋白水平表達(dá)前者較高；提示：LPS可導(dǎo)致HIBECs中TLR4表達(dá)增加。
　　3.CON+LPS組Snail mRNA表達(dá)量高于CON組（P<0.05）；蛋白水平表達(dá)前者較高；提示：LPS可導(dǎo)致HIBECs中Snail表達(dá)增加。
　　4.KD+LPS組TLR4 SiRNA慢病毒轉(zhuǎn)染HIBECs，TLR4 mRNA表達(dá)量較NC+L PS組

5、降低（P<0.05）；蛋白水平表達(dá)量前者較低。提示：TLR4 SiRNA慢病毒轉(zhuǎn)染能減弱LPS誘導(dǎo)HIBECs中TLR4基因表達(dá)上調(diào)。
　　5.沉默HIBECs中TLR4，KD+LPS組Snail mRNA表達(dá)量較NC+LPS組降低（P<0.05）。蛋白水平表達(dá)前者較低。提示：沉默TLR4能減弱LPS誘導(dǎo)HIBECs中Sn ail基因表達(dá)上調(diào)。
　　6.沉默HIBECs中TLR4，KD+LPS組細(xì)胞由上皮向間葉樣細(xì)胞形態(tài)改變

6、不明顯。與NC+LPS組比較，KD+LPS組上皮標(biāo)記物E-cadherin mRNA表達(dá)較高（P<0.05），間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin、Vimentin mRNA表達(dá)較低（P<0.05，P<0.05）。兩組上述指標(biāo)蛋白水平表達(dá)趨勢與mRNA表達(dá)一致。提示：沉默TLR4能阻斷LPS誘導(dǎo)HIBEC s發(fā)生EMT。
　　結(jié)論：
　　1. LPS通過激活TLR4誘導(dǎo)HIBEC發(fā)生EMT；
　　2. LPS誘導(dǎo)HIBECs