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文檔簡介
1、目的:明確自噬對肝癌細(xì)胞侵襲行為的作用及其機(jī)制
方法:以不含營養(yǎng)物質(zhì)和血清的Hank平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS)孵育HepG2和BEL7402肝癌細(xì)胞6h作為饑餓處理誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬活性的增高,以Transwell法檢測饑餓處理對肝癌細(xì)胞侵襲性的影響。用免疫印跡和免疫熒光技術(shù)檢測HepG2和BEL7402肝癌細(xì)胞在不同處理情況下上皮標(biāo)志物、間質(zhì)標(biāo)志物和MMP-9表達(dá)情況的差
2、異,探討上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)在自噬誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞侵襲性增加中的作用。通過轉(zhuǎn)染針對Atg3和Atg7的siRNA或加入氯喹的方式抑制肝癌細(xì)胞的自噬活性;以重組TGF-β1及SIS3分別激活和阻斷TGF-β/Smad3信號通路,觀察對肝癌細(xì)胞自噬活性和(或)TGF-β/Smad3信號通路的活性進(jìn)行干預(yù)后,肝癌細(xì)胞自噬誘導(dǎo)的侵襲性增加及伴隨的自噬活性、上皮標(biāo)志物、間質(zhì)標(biāo)志
3、物和MMP-9表達(dá)情況的改變,探討自噬影響肝癌細(xì)胞侵襲性的確切機(jī)制。
結(jié)果:饑餓處理可有效誘導(dǎo)HepG2和BEL7402肝癌細(xì)胞的自噬活性和侵襲性的升高,并伴隨著上皮標(biāo)志物表達(dá)降低和間質(zhì)標(biāo)志物、MMP-9表達(dá)升高。上述饑餓誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞侵襲性的升高和上皮標(biāo)志物、間質(zhì)標(biāo)志物、MMP-9的表達(dá)水平的改變可因由Atg3和Atg7的沉默和氯喹的加入引起的自噬缺陷而被抑制。由肝癌細(xì)胞自噬缺陷引起的饑餓處理時肝細(xì)胞侵襲性升高和上皮標(biāo)志物、
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