C-Cbl介導(dǎo)IRF3泛素化負(fù)向調(diào)控抗病毒固有免疫.pdf

1、TLR、RLR和NLR三類(lèi)模式識(shí)別受體(PRR)是免疫細(xì)胞識(shí)別病原保守成分啟動(dòng)固有免疫和適應(yīng)性免疫的重要分子。固有免疫系統(tǒng)組成了抗病毒感染的第一道防線(xiàn)，機(jī)體識(shí)別入侵的病毒后， PRRs通過(guò)活化下游的信號(hào)通路啟動(dòng)免疫應(yīng)答，進(jìn)而分泌Ⅰ型干擾素(Interferons，IFNs)清除病毒。在病毒感染中，轉(zhuǎn)錄因子IRF3(Interferonregulatory factor3)被磷酸化激活，二聚化后轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，誘導(dǎo)干擾素的分泌和啟動(dòng)細(xì)胞抗病毒

2、免疫反應(yīng)。對(duì)IRF3翻譯后修飾的研究中，泛素化和去泛素化在調(diào)控IRF3的活性中起重要作用。本課題擬對(duì)此展開(kāi)研究，期望闡明IRF3轉(zhuǎn)錄后修飾在模式識(shí)別受體介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素反應(yīng)中的分子機(jī)制，為病毒感染性疾病防治新方法的建立提供新的候選分子。
　　c-Cbl(Casitas B-lineage lymphoma)是細(xì)胞中的原癌基因，在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中檢測(cè)到有廣泛突變。作為E3泛素酶，c-Cbl是受體酪氨酸激酶的重要調(diào)節(jié)分子。c-Cbl

3、的TKB(tyrosine kinase binding)結(jié)構(gòu)域能夠結(jié)合受體酪氨酸激酶，c-Cbl的RING手指結(jié)構(gòu)域?qū)λ腅3酶活性起到重要作用。以前的研究表明，c-Cbl可以作為E3分子調(diào)控RIG-Ⅰ、IRF8等分子泛素化，與細(xì)胞Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生以及抗病毒反應(yīng)有密切的關(guān)系。
　　我們研究發(fā)現(xiàn)c-Cbl能負(fù)向調(diào)控PRRs誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生，用特異性的c-Cbl干擾RNA下調(diào)小鼠來(lái)源的巨噬細(xì)胞c-Cbl表達(dá)，能夠促進(jìn)VSV、p

4、oly(I∶C)和LPS刺激誘導(dǎo)的IFN-β的產(chǎn)生。利用雙熒光素酶報(bào)告基因方法，用c-Cbl篩選了細(xì)胞抗病毒信號(hào)通路上重要的節(jié)點(diǎn)蛋白R(shí)IG-Ⅰ、MAVS、TBK1和IRF3，結(jié)果發(fā)現(xiàn)c-Cbl能夠明顯影響IRF3蛋白的穩(wěn)定性，而未見(jiàn)其mRNA水平的變化。同時(shí)，我們用免疫共沉淀的方法檢測(cè)到c-Cbl與IRF3在生理狀態(tài)下能夠結(jié)合，且證實(shí)c-Cbl可以促進(jìn)IRF3的K-48位泛素化及其蛋白酶體途徑的降解，從而負(fù)向調(diào)控病毒感染誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素