濟寧百日雞對腸炎沙門氏菌感染的免疫反應(yīng)及其腸道微生物多樣性變化.pdf

1、腸炎沙門氏菌（Salmonella enteritidis，SE）是常見的人畜共患病原菌，能夠引起家禽急性胃腸炎等疾病甚至發(fā)病致死，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失，也可以感染人，造成人食物中毒，是影響人身心健康的重要病原菌之一。
　　本研究以中國地方雞種具有抗病抗逆特性為切入點，選用腸炎沙門氏菌陰性濟寧百日雞，隨機分為兩個組，試驗組口服灌注腸炎沙門氏菌，對照組接種等量滅菌的PBS。分別在感染后第1、3、7、14、21、28和35天7個時

2、間點，測定雞免疫器官指數(shù)；采用石蠟切片和H.E.染色的方法對7個不同時間點濟寧百日雞的空腸絨毛結(jié)構(gòu)進行組織形態(tài)學(xué)觀察，并通過顯微圖像分析技術(shù)和統(tǒng)計學(xué)方法比較接種腸炎沙門氏菌對腸道黏膜絨毛結(jié)構(gòu)的影響；于接種后7個時間點，利用定量PCR測定試驗組與對照組盲腸組織Toll-樣受體基因（TLR2和TLR4）與Nod樣受體基因（NOD1和NALP3）表達變化，并檢測細胞炎癥因子水平；為深入了解腸炎沙門氏菌感染對腸道菌群結(jié)構(gòu)和組成的影響，對感染后7

3、個時間點對照組與試驗組盲腸內(nèi)容物DNA樣品進行16Sr DNA測序。
　　研究結(jié)果如下：
　　（1）接種腸炎沙門氏菌之后，試驗組與對照組的體重與免疫器官指數(shù)差異不顯著。感染后7個時間點，對照組腸絨毛長度增加程度均大于試驗組，且在接種后的第1天，試驗組絨毛長度顯著低于對照組（P＜0.05）。接種后7個時間點，對照組絨毛長度與隱窩深度的比值（V/C）均大于試驗組，差異不顯著。表明感染腸炎沙門氏菌降低了濟寧白日雞的消化吸收能力。<

4、br>　?。?）熒光定量PCR結(jié)果顯示，盲腸中TLR2的表達量在感染后第3天和感染后第21天差異極顯著（P＜0.01），試驗組表達量分別為對照組的2.0倍（3DPI）和1.5倍（21DPI）。感染后第3天，試驗組TLR4的表達量是對照組的1.8倍，差異極顯著（P＜0.01），對照組與試驗組TLR4的表達量在感染后第21天差異顯著（P＜0.05），試驗組表達量是對照組的1.5倍。試驗組NOD1和NALP3的表達量在感染后第7天，14天和2

5、1天下調(diào)，其余時間點試驗組表達量上調(diào)，其中在感染后第7天，試驗組Nod1和NALP3的表達量顯著低于對照組（P＜0.05），表達量分別是對照組的0.37和0.6倍。
　?。?）在感染后7個時間點，試驗組盲腸內(nèi)容物操作分類單位（OTUs）顯著降低，說明試驗組盲腸微生物的種類多樣性顯著減少。在門的水平上，盲腸內(nèi)容物中共含有7個門，腸炎沙門氏菌感染降低了柔壁菌門（Tenericutes）、變形菌門（Proteobacteria）和擬桿菌

6、門（Bacteroidetes）的豐度，增加了厚壁菌門（Firmicutes）和放線菌門（Actinobacteria）豐度。感染前期，腸道內(nèi)容物細菌以變形菌門和厚壁菌門為主，后期擬桿菌門和厚壁菌門變?yōu)閮?yōu)勢菌。對盲腸內(nèi)容物菌群多樣性的結(jié)構(gòu)進行的主成份分析（PCA），結(jié)果顯示，試驗組與對照組盲腸微生物群落結(jié)構(gòu)和組成在感染后14天時有顯著差異（P＜0.05），說明感染SE改變了盲腸微生物群落結(jié)構(gòu)和組成。
　　綜上所述，感染腸炎沙門氏菌