普氏原羚腸道微生物多樣性的研究.pdf

1、動物胃腸道存在著大量的微生物群落,構成一個復雜的微生物區(qū)系。這個復雜的群落包含有3000～5000種菌,總數達1013～1014,而其包含的基因數目是人基因組的100倍。通過對糞便中腸道微生物的研究能獲得大量的生物學信息,因此它是腸道微生物研究領域的重要材料。方便高效的保存方法是開展動物腸道微生物研究的重要前提。
　　 珍稀瀕危動物的遷地保護和重引入是動物保護工作者和全社會共同關注的熱點問題,但迄今為止難以找到一個合理的生理指標

2、對兩者進行健康評價。腸道微生物與哺乳動物的食物與能量代謝,及其健康有重要的關系,并且與宿主有很多相關性,而且,做為腸道微生物研究樣品的新鮮糞便較動物本身來說,取樣要方便得多。普氏原羚(Procapra przewalskii)是我國特有的珍稀動物。最新調查顯示其數量僅存600余只,處于極瀕危狀態(tài)。
　　 1、本研究選用了4℃保存,-20℃保存,DETs緩沖液和100％乙醇保存等4種方法探討不同保存方法對糞便中腸道微生物DNA的保

3、存效果,用T-RFLP(末端限制性片段長度多態(tài)性)結合16S rDNA分析,對不同方法不同保存時間(24h,7天,30天,90天)的DNA保存效果進行評估。結果表明:
　　 (1)4℃保存方法在24小時內保存效果良好,7天的保存效果也尚可,平均92.1％的T-RFs(末端限制性片段)得到保存。不推薦長期保存使用。
　　 (2)-20℃對糞便中腸道微生物DNA保存效果最好,30天內平均98.9％的T-RFs仍然存在,90天

4、后有一定量腸道微生物的DNA降解,平均有83.1％的T-RFs得到保存。
　　 (3)DETs buffer也能對糞便中腸道微生物DNA保存有效保存30天,平均95.6％T-RFs得到保存,可方便于地用于野外采樣,但三個月后其效果低于-20℃保存,并且細菌群落結構發(fā)生變化,70.3％的T-RFs得到保存。
　　 (4)100％乙醇在一個星期內保存效果良好,一個月后微生物群落有一定變化,平均有86.6％的T-RFs得到保存

5、,考慮到其便攜性與方便或得,對野外采樣較有價值。
　　 (5)優(yōu)勢T-RFs(相對峰面積＞1％)相對于非優(yōu)勢T-RFs而言穩(wěn)定性更高。
　　 2、通過T-RFLP和16S rDNA克隆文庫構建,對青海省青海湖周邊5個普世原羚分布區(qū)域野生種群和飼養(yǎng)種群的23個新鮮糞便樣品腸道微生物多樣性進行了研究,實驗結論如下:
　　 (1)普氏原羚做為一個物種總體而言,其各個個體間的腸道細菌具有較高的相似性,不同區(qū)域間個體腸道細

6、菌T-RFLP圖譜相似性在50％～60％左右,相同區(qū)域內個體T-RFLP圖譜的相似性一般在70％～80％左右。
　　 (2)不同區(qū)域的野生普氏原羚和圈養(yǎng)普氏原羚的腸道細菌有其各自的特點。同區(qū)域間個體T-RFLP圖譜的相似性比區(qū)域外個體一般要高,各區(qū)域樣品及圈養(yǎng)樣品都有其特有的T-RFs,對于相對峰面積最大的T-RFs所代表的優(yōu)勢菌群而言,野生與圈養(yǎng)樣品有很大的不同。
　　 (3)普氏原羚腸道中存在大量末培養(yǎng)細菌,做為一個