南亞實蠅成蟲腸道微生物分子多樣性分析及引誘效果.pdf

1、南亞實蠅（Bactrocera tau）是一種重要的世界性檢疫害蟲，其食性雜，寄主廣，繁殖力強，防治困難，每年給果蔬業(yè)及其對外貿易造成巨大的經濟損失。本文通過16S rDNA V3-V4高變區(qū)的高通量測序技術，分析了南亞實蠅雌、雄成蟲不同發(fā)育階段腸道內的細菌多樣性及群落結構組成。在此基礎上運用傳統(tǒng)微生物分離和16S rDNA(V6-V8)高變區(qū)的Sanger測序相結合的方法，分離、鑒定了性成熟的雌、雄南亞實蠅成蟲腸道內的可培養(yǎng)細菌并研究

2、了腸道細菌對寄主成蟲的引誘效果。最終為探討南亞實蠅腸道細菌對其生理功能的影響和利用微生物防治此類害蟲提供新的思路和科學依據。主要研究結果如下：
　　在門的分類水平上，南亞實蠅羽化未取食雌性成蟲腸道內微生物菌群分屬于10個門，分別是變形菌門、厚壁桿菌門、擬桿菌門、放線菌門、芽單胞菌門、酸桿菌門、衣原體門、Candidatus_Saccharibacteria、梭桿菌門和浮游菌門；羽化未取食雄性成蟲腸道內微生物菌群分屬于11個門，分別

3、是擬桿菌門、厚壁桿菌門、放線菌門、變形菌門、芽單胞菌門、Candidatus_Saccharibacteria、酸桿菌門、衣原體門、脫鐵桿菌門、梭桿菌門和浮游菌門；10日齡雌性成蟲腸道內細菌菌群分屬于4個門，分別為變形菌門、擬桿菌門、厚壁桿菌門和放線菌門；10日齡雄性成蟲、性成熟雌性成蟲和性成熟雄性成蟲腸道內細菌均分屬于3個門，分別是變形菌門、擬桿菌門和厚壁桿菌門，羽化未取食雌、雄性成蟲腸道內細菌較其余多樣性高，但所有樣本的腸道優(yōu)勢細菌

4、類群均為擬桿菌門、變形菌門和厚壁菌門。
　　在綱的分類水平上，南亞實蠅羽化未取食雌性腸道內細菌的優(yōu)勢菌綱是γ變形菌綱；羽化未取食雄性腸道內細菌的優(yōu)勢菌綱為芽孢桿菌綱、γ變形菌綱、黃桿菌綱和擬桿菌綱；擬桿菌綱是10日齡雌、雄成蟲腸道細菌的優(yōu)勢菌綱，γ變形菌綱次之；性成熟的雌、雄成蟲腸道細菌優(yōu)勢菌綱為擬桿菌綱和γ變形菌綱。
　　在目的分類水平上，南亞實蠅羽化未取食雌性腸道內生細菌主要是腸桿菌目、擬桿菌目和弧菌目等；羽化未取食雄性

5、腸道內生菌在腸桿菌目、擬桿菌目、Orbales、乳桿菌目、黃桿菌目、鞘脂桿菌目、假單胞目、芽孢桿菌目、伯克氏菌目、放線菌目、黃單孢菌目和梭菌目等中均有分布；10日齡雌性腸道內生菌的優(yōu)勢菌目是腸桿菌目和擬桿菌目；10日齡雄性腸道內生菌的優(yōu)勢菌目為腸桿菌目、擬桿菌目和Orbales；性成熟的雌性腸道內生菌主要是腸桿菌目、擬桿菌目、Orbales、乳桿菌目和氣單胞菌目的細菌；性成熟的雄性成腸道內生菌主要是腸桿菌目、擬桿菌目、Orbales和乳

6、桿菌目的細菌。
　　在科的分類水平上，南亞實蠅羽化未取食雌性腸道內生菌主要分布在腸桿菌科和弧菌科；羽化未取食雄性腸道內生菌主要分布在腸桿菌科、紫單胞菌科、Orbaceae、腸球菌科、黃桿菌科、擬桿菌科、假單胞菌科、鞘脂桿菌科、黃單胞菌科、動性球菌科、普雷沃氏菌科、幾丁質菌科、毛螺菌科和叢毛單胞菌科；10日齡雌性腸道內生菌主要分布在腸桿菌科和紫單胞菌科；10日齡雄性腸道內生菌在腸桿菌科、紫單胞菌科和Orbaceae中均有分布；性成熟

7、的雌性腸道內生菌的優(yōu)勢菌科為腸桿菌科、紫單胞菌科、Orbaceae、腸球菌科和氣單胞菌科的細菌；性成熟的雄性腸道內生菌的優(yōu)勢菌科為腸桿菌科、紫單胞菌科、Orbaceae和腸球菌科的細菌。
　　在屬的分類水平上，南亞實蠅羽化未取食雌性腸道優(yōu)勢菌群為腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬及普羅維登斯屬；羽化未取食雄性腸道內的一大優(yōu)勢菌屬主要是擬桿菌門中的金黃桿菌屬、紫單胞菌科的未知菌屬、黃桿菌屬、Orbus和擬桿菌屬，其次是厚壁菌門中腸球菌科的未知菌

8、屬，最后是變形菌門中的Orbus、寡養(yǎng)單胞菌屬、腸桿菌屬、普羅威登斯菌屬、沙雷氏菌屬及假單胞菌屬。10日齡雌性腸道優(yōu)勢菌群是普羅維登斯屬、腸桿菌屬、Dysgonomonas和沙雷氏菌屬,10日齡雄性腸道內細菌在腸桿菌屬、普羅威登斯菌屬、Dysgonomonas和Orbus中均有分布，性成熟的雌性腸道內細菌在普羅威登斯菌屬、Orbus、沙雷氏菌屬、腸桿菌屬、Dysgonomonas和阪崎腸桿菌中均有分布，性成熟的雄性腸道內生菌在Orbus

9、、沙雷氏菌屬、Dysgonomonas和腸桿菌屬中均有分布。
　　6個樣品及組間的腸道菌群差異性分析表明，南亞實蠅雌或者雄性成蟲不同發(fā)育階段腸道菌群的結構及組成存在一定的差異性，而同一發(fā)育階段雌、雄腸道菌群的結構和組成類似。
　　從性成熟的雌、雄南亞實蠅腸道分離得到41種不同的可培養(yǎng)菌，均為腸桿菌科的細菌。雌、雄腸道共同的菌屬是腸桿菌屬、普羅維登斯菌屬和沙雷氏菌屬。
　　室內引誘實驗發(fā)現，所有供試菌株的高壓滅菌液對南亞

10、實蠅均有顯著地引誘效果，其中四株菌Enterobacter cloacae（BF16）、Enterobacter sp.（BF(12)）、Enterobacter sp.（BF23）和Enterobacter sp.（BF(32)）的高壓滅菌液對8日齡、性成熟的南亞實蠅的引誘效果較好，對8日齡南亞實蠅室內引誘率分別達到24.33％、20.67%、14.67%和14.00%，室外引誘率分別達到9.61%、5.61%、6.06%和8.83%