雞白痢雞傷寒沙門氏菌微型酶免疫傳感器研究.pdf

1、雞白痢沙門氏菌（Salmonella pullorum）和雞傷寒沙門氏菌（Salmonella gallinarum）能分別引起雞的白痢和傷寒疾病，一旦感染通常是兩病并發(fā)，發(fā)病率和死亡率極高，對(duì)國內(nèi)外家禽危害巨大，這兩種菌還常通過污染禽類食品傳播給人類，成為人食源性疾病的重要危害因素，對(duì)禽類養(yǎng)殖業(yè)和人類健康造成嚴(yán)重威脅。目前畜禽養(yǎng)殖業(yè)把防治食源性疾病提到了首要位置?？焖贉?zhǔn)確對(duì)雞白痢雞傷寒沙門氏菌造成的污染和疾病進(jìn)行及時(shí)的監(jiān)管、診斷、預(yù)警

2、和控制是非常必要的。
　　電化學(xué)酶免疫傳感器是一種將電化學(xué)檢測技術(shù)和酶免疫特異性技術(shù)相結(jié)合的方法，具有高靈敏度，快速高效，操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的潛在應(yīng)用前景[6-8]。目前國內(nèi)外對(duì)電化學(xué)酶免疫傳感器的研究活躍，主要是在食品安全領(lǐng)域?qū)κ吃葱灾虏【?、毒素病毒和藥物殘留等的快速檢測的研究有一定的報(bào)道，但在動(dòng)物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究報(bào)道罕見。應(yīng)用新型材料和方法，例如石墨烯，納米金等，以改善電化學(xué)酶免疫傳感器的不足，制備新型的酶免疫傳感器是近年

3、來研究的熱點(diǎn)。
　　本論文主要圍繞以下幾個(gè)方面展開研究工作:
　　1.基于電化學(xué)共沉積石墨烯納米金雞白痢雞傷寒沙門氏菌直接法酶免疫傳感器的研究
　　為研制一種新型的具有高靈敏度和穩(wěn)定性的電化學(xué)酶免疫傳感器，用于快速檢測S.pullorum& S.gallinarum，采用電化學(xué)還原法，將石墨烯(ERGO)與納米金(AuNPs)共沉積修飾于絲網(wǎng)印刷碳電極表面，建成電學(xué)和生物學(xué)相容性顯著改進(jìn)的ERGO-AuNPs電極，構(gòu)建

4、快速檢測S.pullorum& S.gallinarum的酶免疫傳感器。以硫堇為分子探針，采用循環(huán)伏安法(CV)和交流阻抗譜法(EIS)分別考察檢測過程不同修飾電極的電化學(xué)特性，并對(duì)相關(guān)檢測條件進(jìn)行優(yōu)化。研究結(jié)果顯示，在優(yōu)化的測定條件下，該酶免疫傳感器在S.pullorum& S.gallinarum濃度為103～109 cfu/mL時(shí)有良好的線性響應(yīng)，檢測限為1.6×102 cfu/mL(S/N=3)。該酶免疫傳感器靈敏度高、具有良好

5、的特異性和穩(wěn)定性（4℃放置30 d后，響應(yīng)電流為初始值的94.48％）。石墨烯和納米金共沉積形成的復(fù)合膜效果良好，為后續(xù)研究打下基礎(chǔ)。
　　2.基于電化學(xué)共沉積石墨烯納米金雞白痢雞傷寒沙門氏菌夾心法酶免疫傳感器的研究
　　為增強(qiáng)和改善響應(yīng)信號(hào)，嘗試研制一種新型快速檢測S.pullorum& S.gallinarum的電化學(xué)酶免疫傳感器。首先采用電化學(xué)還原法，將石墨烯(ERGO)與納米金(AuNPs)共沉積修飾于絲網(wǎng)印刷碳電極

6、表面，建成電學(xué)和生物學(xué)相容性顯著改進(jìn)的ERGO-AuNPs電極，并結(jié)合抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的雙抗體夾心法，構(gòu)建一種快速檢測S.pullorum&S.gallinarum的酶免疫傳感器。以硫堇為分子探針，采用循環(huán)伏安法(CV)和交流阻抗譜法(EIS)考察檢測過程不同修飾電極的電化學(xué)特性，并優(yōu)化檢測條件。研究結(jié)果顯示，在優(yōu)化的測定條件下，該酶免疫傳感器在S.pullorum& S.gallinarum的濃度為103～109 cfu/mL時(shí)有

7、良好的線性響應(yīng)，檢測限為1.2×102 cfu/mL(S/N=3)。石墨烯和納米金共沉積形成的復(fù)合膜顯著提高電極表面電子傳遞能力，增大電流響應(yīng)信號(hào)，增強(qiáng)了酶免疫傳感器的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性(4℃放置30 d后，響應(yīng)電流為初始值的97.14％)。不僅可以檢測S.pullorum& S.gallinarum，還可以成為研究快速檢測其它食源性致病菌及生物毒素等各類抗原物質(zhì)酶免疫傳感器的基礎(chǔ)模型。
　　3.基于電化學(xué)共沉積石墨烯納米金雞

8、白痢雞傷寒沙門氏菌間接法酶免疫傳感器的研究
　　為建立一種用于快速準(zhǔn)確檢測S.pullorum& S.gallinarum的新型電化學(xué)酶免疫傳感器，改善以往傳感器的不足，通過電化學(xué)還原法將石墨烯(ERGO)與納米金(AuNPs)共沉積修飾于絲網(wǎng)印刷碳電極表面作為基底電極固定載體，引入酶標(biāo)二抗利用間接法構(gòu)建電化學(xué)檢測方法。以硫堇為分子探針采用循環(huán)伏安法(CV)和交流阻抗譜法(EIS)考察不同修飾電極的電化學(xué)特性，并對(duì)檢測條件進(jìn)行優(yōu)化