腎上腺髓質(zhì)素基因pEGFP-N3重組載體的構(gòu)建、表達及其對大鼠系膜細胞的作用.pdf

1、基因治療是二十世紀八十年代后期出現(xiàn)的新興邊緣科學，其又可分為正義基因療法和反義基因療法：正義基因療法是在DNA或RNA水平上把某些外源目的基因?qū)胂鄳?yīng)的靶細胞，持續(xù)表達目的蛋白從而產(chǎn)生特定的生物學效應(yīng)以達到治療目的；反義基因療法是在DNA或RNA水平上阻斷某些內(nèi)源目的基因的異常合成?！　∧I上腺髓質(zhì)素(adrenomedullin，AM)是1993年Kitamura等人于腎上腺嗜鉻細胞瘤(phaeochromocytoma，PC)組織提

2、取物中發(fā)現(xiàn)的一種生物活性肽。此后，研究人員發(fā)現(xiàn)腎上腺髓質(zhì)素廣泛表達于體內(nèi)多種組織。AM具有舒張血管、降低血壓、改善心臟收縮功能、增加腎臟血流、利尿利鈉等多種作用，被認為是在治療高血壓、心力衰竭、腎功能衰竭等多種心血管腎臟疾病中具有巨大潛在應(yīng)用價值的一種內(nèi)源性多肽。　　本實驗中，我們設(shè)計、構(gòu)建了包含AM基因編碼全序列的pEGFP-N3重組載體(pEGFP-N3-AM1-2)，以表達AM基因產(chǎn)物-EGFP融合蛋白。另外，為了進一步提高重組

3、質(zhì)粒的療效，本實驗組其他成員嘗試對重組載體pEGFP-N3-AM1-2進行了改造，構(gòu)建了含有突變AM基因的pEGFP-N3重組載體(pEGFP-N3-AM1-3)?！　榱颂剿鰽M基因療法改善大鼠腎臟功能減退的作用機理。我們采用陽離子脂質(zhì)體包裹轉(zhuǎn)染法，以pEGFP-N3-AM1-2或pEGFP-N3-AM1-3分別轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的RMCs，48小時后，應(yīng)用MTT法檢測其對RMCs細胞增殖的影響，應(yīng)用半定量RT-PCR方法檢測其對RMCs