造血調(diào)節(jié)因子M-CSF和EDAG的克隆及性質(zhì)研究.pdf

1、造血生長因子和轉(zhuǎn)錄因子對造血細(xì)胞的分化和發(fā)育起著決定性作用.該文選擇了巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)和新發(fā)現(xiàn)的造血相關(guān)基因(EDAG)作為研究造血調(diào)控分子機(jī)制的入門.J6-1細(xì)胞系是該室建立的人白血病細(xì)胞系,呈現(xiàn)霍奇金病(HD)細(xì)胞系的性質(zhì),也表現(xiàn)出明顯的異質(zhì)性.從J6-1細(xì)胞分離到膜結(jié)合因子(MAF-J6-1)和它的受體(MAF-J6-1-R).該實(shí)驗(yàn)室多年業(yè)的研究證明MAF-J6-1很可能是膜結(jié)合型的M-CSF,但尚未克隆其編碼

2、基因,缺乏直接證據(jù).該研究擬克隆MAF-J6-1及其受體的編碼基因并進(jìn)行序列測定,從分子水平證實(shí)MAF-J6-1是否就是膜結(jié)合型的M-CSF.該實(shí)驗(yàn)采用RT-PCR方法從J6-1細(xì)胞克隆出M-CSF及其受體基因的編碼區(qū),結(jié)果表明J6-1細(xì)胞中存在著m-M-CSF和s-M-CSF兩種mRNA轉(zhuǎn)錄本.該實(shí)驗(yàn)采用半定量RT-PCR技術(shù)對人白血病細(xì)胞系、正常人骨髓、培養(yǎng)的人胚肺細(xì)胞及臍血CD34<'+>細(xì)胞中EDAG mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行了檢

3、測.結(jié)果顯示,EDAG基因在K562、KG-1a、Jurket、Namava細(xì)胞系及臍血CD34<'+>細(xì)胞中有較高的表達(dá),在Raji、LCL、SMMC-7721細(xì)胞和正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞中次之,在U937細(xì)胞中表達(dá)較弱,而HL-60、NB4、J6-1細(xì)胞系和培養(yǎng)的人胚肺細(xì)胞均沒有測出EDAG mRNA的表達(dá).RNA干擾(RNAi)是利用具有同源性的雙鏈RNA誘發(fā)序列特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默的現(xiàn)象,具有高效性和特異性,已成為基因功能研究的一