槲皮素對人角質形成細胞的NF-κB和IL-6下調作用及機制.pdf

1、背景:
　　近年研究發(fā)現各種疾病包括銀屑病既與基因學，也與表觀遺傳學的改變有關，生物多酚對表觀遺傳學的改變是可逆的。調節(jié)癌癥和自體免疫疾病的表觀遺傳藥物是目前研究的熱點，而目前關于調節(jié)癌癥的表觀遺傳藥物研究報道較多，但有關銀屑病的這方面研究尚處于起步階段。生物多酚可用于癌癥和自體免疫疾病的預防和治療，且生物多酚可替代毒性強的藥物和已出現治療耐受的糖皮質激素等藥物。銀屑病是由多基因遺傳決定的慢性皮膚病，涉及免疫、炎癥、細胞增殖與抗凋

2、亡、神經介質等多方面因素。銀屑病發(fā)病機制復雜，目前認為是由遺傳學改變和表觀遺傳學改變共同作用。銀屑病的病變特征主要為免疫源性炎癥和角質形成細胞增殖。目前有關銀屑病的初步報道表明:銀屑病的發(fā)病與表觀遺傳學改變密切相關。IP-10是干擾素-r(INF-r)誘導產生的分子量為10kDa的蛋白質，具有前炎癥因子（pro-inflammatory factor）和趨化因子(chemokine)的作用。IP-10不但吸引炎癥細胞趨向病灶，而且尚可促

3、進角質形成細胞增生。近年報道銀屑病患者皮損的角質形成細胞的IP-10比血漿的多種細胞因子，更能反映銀屑病的病情。因此，我們將IP-10誘導的角質形成細胞作為銀屑病皮損樣角質形成細胞，作為銀屑病治療藥物的的靶細胞。生物多酚槲皮素可抑制各種腫瘤細胞的生長，并誘導其分化和凋亡，且槲皮素可抑制白介素-6(IL-6)炎癥因子的產生而顯示一定的抗炎癥效應。NF-κB核轉錄因子可被應激、炎癥、增殖等激活，通過上調細胞周期蛋白CyclinD1和細胞周期

4、進展促進細胞增殖。由于槲皮素難溶于水，但脂質體槲皮素可溶于水易被細胞吸收，因此我們制備了納米脂質體槲皮素。本研究中心的MTT實驗已表明20ng/ml的IP-10可促進正常角質形成細胞增殖，而40μmol/l的Q或10-7mol/l的D可呈現拮抗作用。因此本研究探討多酚類槲皮素或地塞米松能否通過表觀遺傳修飾抑制IP-10誘導的角質形成細胞增殖及炎癥的效應，并比較地塞米松與槲皮素作用的差異。在此基礎上本實驗擬比較Q或D能否通過下調p16IN

5、K4α甲基化和HDAC1的表觀遺傳-NF-κB信號途徑而下調角質形成細胞增殖的NF-κB和IL-6炎癥因子的表達，進一步研究Q或D用藥對IP-10誘導的角質形成細胞的增殖和炎癥變化的治療作用，為臨床上治療以角質形成細胞過度增生和炎癥為特征的銀屑病提供新思路。
　　目的:
　　探討納米脂質體槲皮素(nanoliposomal quercetin，Q)下調角質形成細胞內核轉錄因子(NF-κB)和白介素-6(IL-6)表達的表觀遺

6、傳學修飾效應，并與地塞米松（dexamethasone，D）的效應進行比較。
　　方法:
　　將培養(yǎng)的HaCaT角質形成細胞分為3組:①IP-10+Q組:20ng/mlIP-10+40μmol/lQ②IP-10+D組:20ng/mlIP-10+10-7mol/lD③對照組（C組）:20ng/mlIP-10，三組細胞均培養(yǎng)48h。對各組細胞進行p16INK4α的甲基化特異PCR(MSP)，將各組細胞內提取的蛋白質進行DNMT1

7、，HDAC1，NF-κBp65，CyclinD1，IL-6及P16的免疫印跡并對各組細胞進行HDAC1，IL-6免疫細胞化學染色，每組實驗重復3遍。對獲得的數據進行相應的統(tǒng)計學處理。
　　結果:
　　與C組相比，p16INK4α的MSP顯示:①組比②組p16INK4α的DNA甲基化減低顯著，P＜0.05;免疫印跡顯示:①組比②組的DNMT1、HDAC1、NF-κBp65、CyclinD1及IL-6的表達下調顯著，P16INK