槲皮素對高糖培養(yǎng)誘導(dǎo)的人腎小球系膜細(xì)胞NF-κB p65及MCP-1表達(dá)的作用研究.pdf

1、目的：
　　 觀察不同作用時間高葡萄糖(HG)培養(yǎng)誘導(dǎo)的人腎小球系膜細(xì)胞(HMCs)增殖及其核轉(zhuǎn)錄因子-κB p65(NF-κB p65)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)蛋白表達(dá)情況，并采用不同濃度梯度槲皮素(QU)進(jìn)行干預(yù)，評價QU是否具有抑制HG培養(yǎng)誘導(dǎo)的HMCs增殖及其NF-κB p65及MCP-1蛋白表達(dá)的作用，為臨床應(yīng)用QU防治糖尿病腎病(DN)提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 選擇體外培養(yǎng)的HM

2、Cs株為研究對象。分別設(shè)立(1)NG培養(yǎng)組(葡萄糖濃度：5.6mmol.L-1)；(2)HG培養(yǎng)組(葡萄糖濃度：30mmol.L-1)；(3)HG+DMSO溶劑對照組(HG+0.1％DMSO)；(4)HG+不同濃度梯度QU干預(yù)組(HG+QU1、HG+QU2、HG+QU3、HG+QU4組，QU濃度分別為0.5×10-5mol.L-1、1×10-5mol.L-1、2×10-5mol.L-1、4×10-5mol.L-1)，并于12h、24h、

3、48h檢測各組相關(guān)指標(biāo)。采用四甲基偶氮唑藍(lán)滲入法(MTT)檢測HMCs的增殖情況；采用免疫細(xì)胞化學(xué)法(ICC)和蛋白印跡法(Western-blot)檢測HMCs胞核NF-κB p65及胞漿MCP-1蛋白表達(dá)。數(shù)據(jù)運用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、與NG培養(yǎng)組相比，HG培養(yǎng)組HMCs明顯增殖
　　 在HG組培養(yǎng)誘導(dǎo)的48h內(nèi)，HG組HMCs增殖水平明顯高于NG組(p＜0.05)，細(xì)胞增殖

4、隨著刺激時間延長而增加，但增殖率高峰在24h(p＜0.05)；與HG培養(yǎng)組相比，采用不同濃度梯度QU干預(yù)可以明顯抑制HMCs增殖(p＜0.05)，QU對HMCs生長的抑制具有時間、劑量依賴效應(yīng)。
　　 2、ICC法結(jié)果顯示HG培養(yǎng)狀態(tài)下，HMCs中胞核NF-κB p65及胞漿MCP-1表達(dá)增強(qiáng)，而予QU干預(yù)后，二者表達(dá)明顯降低。
　　 NG培養(yǎng)狀態(tài)下，NF-κB p65主要表達(dá)于HMCs胞漿，極少表達(dá)于胞核；MCP-1在

5、HMCs胞漿少量表達(dá)。與NG培養(yǎng)狀態(tài)下相比，在HG培養(yǎng)狀態(tài)下，NF-κB p65在HMCs胞核表達(dá)明顯增強(qiáng)(p＜0.01)，胞漿表達(dá)減弱，即HG培養(yǎng)狀態(tài)，HMCs中NF-κB p65核轉(zhuǎn)位明顯增加；同時MCP-1在胞漿表達(dá)明顯增強(qiáng)(p＜0.01)。而給予QU干預(yù)后，NF-κB p65核轉(zhuǎn)位及MCP-1胞漿表達(dá)明顯降低，與干預(yù)前相比較均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。
　　 3、 Western-blot結(jié)果同樣顯示在HG培養(yǎng)狀態(tài)

6、下，HMCs胞核NF-κB p65及胞漿MCP-1表達(dá)增強(qiáng)，而給予QU干預(yù)后，二者表達(dá)明顯降低，而且胞核NF-κBp65表達(dá)活性與胞漿MCP-1表達(dá)水平呈正相關(guān)。
　　 NG培養(yǎng)狀態(tài)HMCs胞核NF-κB p65及胞漿MCP-1的表達(dá)與培養(yǎng)時間無關(guān)，各培養(yǎng)時間點相比均無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。HG培養(yǎng)誘導(dǎo)48h內(nèi)，隨著培養(yǎng)時間的延長，HMCs胞核NF-κB p65及胞漿MCP-1的表達(dá)也逐漸增加，與其他時間點相比于48h

7、達(dá)最高值(p＜0.01)。給予QU干預(yù)后，HMCs胞核NF-κB p65及胞漿MCP-1表達(dá)均降低，同時發(fā)現(xiàn)胞核NF-κB p65表達(dá)活性與胞漿MCP-1表達(dá)水平呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1、體外HG培養(yǎng)可以刺激HMCs增殖，而且能夠促進(jìn)HMCs胞核NF-κB p65及胞漿MCP-1表達(dá)。
　　 2、HMCs中胞核NF-κB p65表達(dá)及胞漿MCP-1表達(dá)之間存在正相關(guān)關(guān)系，提示HG培養(yǎng)狀態(tài)下NF-κB p