IL-6激活A(yù)TM-NF-κB通路致肺癌細(xì)胞化療耐藥的作用研究.pdf

1、已有研究表明，對(duì)腫瘤的化療可導(dǎo)致ATM(ataxia-telangiectasia mutated，ATM)相關(guān)的腫瘤細(xì)胞多藥耐藥(multiple drug resistance，MDR)的產(chǎn)生，而炎癥因子IL-6水平也與MDR的形成密切相關(guān)。但到目前為止，ATM活化在IL-6所引起的MDR形成中的作用仍不明。因此，本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)IL-6在肺癌細(xì)胞中引起MDR的通路機(jī)制進(jìn)行研究。
　　 為探究IL-6和ATM在化療藥所致MDR形

2、成中的作用，我們以NCI-H446和A549細(xì)胞為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌模型，首先觀察NCI-H446和A549細(xì)胞對(duì)化療藥順鉑和喜樹堿的敏感性，進(jìn)而采用Western blot、RT-PCR和ELISA檢測(cè)兩種細(xì)胞系中IL-6的表達(dá)差異。其次，采用Western blot、RT-PCR和免疫熒光激光共聚焦檢測(cè)IL-6對(duì)MDR相關(guān)蛋白ABCG2、Bcl-2、Bcl-XL和Mcl-1表達(dá)的影響及ATM/NF-κB的活化情況。再次，使用通

3、路抑制劑，探討IL-6引起MDR的通路機(jī)制和IL-6產(chǎn)生的機(jī)制。最后，通過細(xì)胞活力的檢測(cè)，探討ATM/NF-κB抑制劑CGK和BAY11-7082對(duì)肺癌細(xì)胞化療效果的影響。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:1、ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A549細(xì)胞中IL-6的表達(dá)量是NCI-H446細(xì)胞的3.9倍，同時(shí)A549細(xì)胞對(duì)化療藥的敏感性更低。流式結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低表達(dá)IL-6的NCI-H446細(xì)胞經(jīng)順鉑處理后細(xì)胞凋亡率為54.31％，IL-6預(yù)處理組細(xì)胞凋亡

4、率則降低至13％，細(xì)胞凋亡率下降67.3％。2、在低表達(dá)IL-6的NCI-H446細(xì)胞中，IL-6預(yù)處理0-120分鐘，可在蛋白水平和mRNA水平上增加耐藥和抗凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，30分鐘左右作用最為明顯。3、低表達(dá)IL-6的NCI-H446細(xì)胞經(jīng)IL-6的預(yù)處理0-120分鐘后，Western Blot結(jié)果表明，ATM、IκBα和p65磷酸化水平都有所增加，免疫熒光激光共聚焦也得到類似結(jié)果。4、Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ATM

5、激酶抑制劑CGK可減少p65的磷酸化，表明IL-6所致的NF-κB通路的激活依賴于ATM的磷酸化，免疫熒光激光共聚焦也得到類似結(jié)果。同時(shí)ATM/NF-κB的激酶抑制劑預(yù)處理可降低IL-6上調(diào)的耐藥和抗凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。5、以順鉑和喜樹堿分別處理NCI-H446細(xì)胞24小時(shí)和48小時(shí)，ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，IL-6的表達(dá)分別提高了198％和160.5％。6、Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IL-6可激活p38和NF-κB信號(hào)通路，而使用

6、NF-κB和p38信號(hào)通路的抑制劑處理NCI-H446細(xì)胞后，ELISA結(jié)果顯示，順鉑和喜樹堿所誘導(dǎo)的IL-6表達(dá)分別降低了58.1％、28.2％和33.3％、14.2％。7、ATM和NF-κB信號(hào)通路激酶抑制劑預(yù)處理NCI-H446細(xì)胞，與單獨(dú)使用化療藥組相比，NCI-H446細(xì)胞活力更低，光鏡觀察結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，經(jīng)BAY11-7082或CGK/BAY11-7082處理后，NCI-H446細(xì)胞凋亡更為明顯。
　　 總結(jié)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果