槲皮素及1-5-O-槲皮素糖苷對高糖引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷保護(hù)作用的對比研究.pdf

1、目的：
　　1、構(gòu)建內(nèi)皮細(xì)胞高糖損傷模型并檢測氧化應(yīng)激的相關(guān)指標(biāo)。
　　2、探索槲皮素（Quercetin，Qu）和1-5-O-槲皮素糖苷（1-5-O-Quercetin Glycoside，1-5-O-QG）能否通過降低氧化應(yīng)激水平來減輕高糖引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷的程度并比較兩者的差異。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人血管內(nèi)皮細(xì)胞，選取生長狀態(tài)良好的對數(shù)期細(xì)胞入組。實(shí)驗(yàn)分4組:①低糖對照組（葡萄糖濃度為5.5mmol/L

2、+24.5mmol/L甘露醇）；②高糖損傷組(葡萄糖濃度為30mmo1/L)；③高糖+Qu組（30mmol/L葡萄糖+50μmol/LQu）；④高糖+1-5-O-QG組（30mmol/L葡萄糖+50μmol/L1-5-O-QG）；在高糖處理前2h加入藥物，培養(yǎng)48小時后對各組進(jìn)行以下方面檢測：CCK-8檢測各組血管內(nèi)皮細(xì)胞活力，測定血管內(nèi)皮細(xì)胞的乳酸脫氫酶（LDH）活性、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性和

3、丙二醛（MDA）水平，DCF-DA法檢測各組細(xì)胞ROS水平，qRT-PCR測定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）氧化酶4（NADPH oxidase4，NOX4）mRNA、SODmRNA及CATmRNA的水平。
　　結(jié)果：
　?。?）血管內(nèi)皮細(xì)胞活力
　　高糖組細(xì)胞活力明顯低于低糖對照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜

4、0.05）。Qu干預(yù)組及1-5-O-QG干預(yù)組細(xì)胞活力均較高糖組升高,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但兩組細(xì)胞活力差異對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　?。?）LDH活性
　　與低糖組比較，高糖組的細(xì)胞LDH活性高(P<0.05)，Qu組及1-5-O-QG組的細(xì)胞LDH活性均較高糖組下降，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但兩組細(xì)胞LDH活性差異對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明Qu及1-5-O-QG均能降低高糖

5、導(dǎo)致的LDH活性增高，且兩者作用程度無差異。
　　（3）SOD活性
　　與低糖組比較，高糖組的細(xì)胞SOD的活性低(P<0.05)，Qu組及1-5-O-QG組細(xì)胞的SOD的活性均較高糖組升高，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但兩組細(xì)胞SOD活性差異對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明Qu及1-5-O-QG均能緩和高糖導(dǎo)致的SOD活性下降，且兩者作用程度無差異。
　　（4）GSH-Px活性
　　與低糖組比較，高糖

6、組細(xì)胞的谷胱甘肽過氧化物酶活性低(P<0.05)，Qu組及1-5-O-QG組細(xì)胞的谷胱甘肽過氧化物酶活性均較高糖組升高(P<0.05)，但兩組細(xì)胞GSH-Px活性差異對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明Qu及1-5-O-QG均能緩和高糖導(dǎo)致的谷胱甘肽過氧化物酶活性的降低，且兩者作用程度無明顯差異。
　?。?）MDA的生成水平
　　與低糖組比較，高糖組細(xì)胞的MDA的生成水平高(P<0.05)，Qu組及1-5-O-QG組細(xì)胞

7、MDA的生成水平均較高糖組下降，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但兩組細(xì)胞MDA生成水平差異對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明Qu及1-5-O-QG均能降低高糖導(dǎo)致的MDA生成水平升高，但兩者作用程度無明顯差異。
　　（6）DCF-DA法檢測各組細(xì)胞內(nèi)活性氧水平結(jié)果：
　　與低糖組比較，高糖組細(xì)胞的活性氧水平增高(P<0.05)，Qu組及1-5-O-QG組細(xì)胞的活性氧水平均較高糖組降低(P<0.05)，但兩組細(xì)胞內(nèi)活性

8、氧水平差異對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明Qu及1-5-O-QG均能緩和高糖導(dǎo)致的活性氧水平升高，且兩者作用程度無明顯差異。
　　（7）SODmRNA的水平
　　與低糖組比較，高糖組的細(xì)胞SODmRNA的水平下調(diào)(P<0.05)，Qu組及1-5-O-QG組細(xì)胞 SODmRNA的水平均比高糖組上調(diào)(P<0.05)，但兩者SODmRNA的表達(dá)量無明顯差異（P>0.05）。Qu及QG均能降低高糖導(dǎo)致的細(xì)胞SODmRNA水平下

9、調(diào)且兩者作用無明顯差異。
　?。?）CATmRNA的水平
　　與低糖組比較，高糖組的細(xì)胞CATmRNA的水平下調(diào)(P<0.05)，Qu組及1-5-O-QG組細(xì)胞CATmRNA的水平比高糖組上調(diào)(P<0.05)，但兩者CATmRNA的水平無明顯差異（P>0.05）。Qu及1-5-O-QG均能緩和高糖導(dǎo)致的細(xì)胞CATmRNA水平的下調(diào)且兩者作用無明顯差異。
　　（9）NOX4mRNA的水平
　　與低糖組比較，高糖組的

10、細(xì)胞NOX4mRNA的水平上調(diào)(P<0.05)，Qu組及1-5-O-QG組細(xì)胞 NOX4mRNA的水平均較高糖組下調(diào)(P<0.05)，但兩者NOX4mRNA的水平無明顯差異（P>0.05）。說明Qu及1-5-O-QG均能降低高糖導(dǎo)致的細(xì)胞NOX4mRNA水平的上調(diào)且兩者作用無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　（1）槲皮素及1-5-O-槲皮素糖苷均能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)的平衡起到保護(hù)高糖引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用。