槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)HL-7702細(xì)胞損傷的拮抗作用及機制研究.pdf

1、持久性有機污染物是一類化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的化合物，不易在環(huán)境中降解，容易在脂肪組織中蓄積，并在食物鏈中積累與放大。滴滴涕（DDT）是一種典型的持久性有機污染物，盡管禁用多年，但在環(huán)境和食品中仍檢測出了DDT的存在。DDT嚴(yán)重危害人類健康，肝臟作為人體重要的解毒器官，容易受到DDT的攻擊，可誘發(fā)肝損傷甚至肝癌。槲皮素是一種廣泛存在于植物中的黃酮類化合物，具有抗氧化、抗炎癥、抗病毒和抗癌等生物活性。許多研究顯示，槲皮素可以拮抗多種外源性化合物對肝

2、臟的損傷，然而關(guān)于槲皮素對DDT誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷的拮抗效果及機制方面的研究，還沒有直接相關(guān)的報道。本研究以人正常肝細(xì)胞 HL-7702為體外模型，探討槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷的拮抗作用及其機制。研究內(nèi)容包括如下部分：
　　第一部分：通過MTT法檢測槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞存活率的影響；通過LDH實驗檢測槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞釋放乳酸脫氫酶的影響。結(jié)果表明，o,p’-

3、DDT可對人正常肝細(xì)胞HL-7702產(chǎn)生細(xì)胞毒性，而槲皮素可拮抗o,p’-DDT對肝細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
　　第二部分：通過單細(xì)胞凝膠電泳實驗，檢測槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞DNA單鍵斷裂的影響；通過微核實驗，檢測槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞染色體損傷的影響；通過DNA蛋白質(zhì)交聯(lián)實驗，檢測槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞NDA交聯(lián)的影響。結(jié)果表明，o,p’-DDT可對人正常肝細(xì)

4、胞HL-7702產(chǎn)生基因毒性，而槲皮素可拮抗o,p’-DDT對肝細(xì)胞的基因毒性。
　　第三部分：通過DAPI染色檢測槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞產(chǎn)生凋亡小體的影響；通過Annexin V-FITC/PI流式分析檢測槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞凋亡的影響；通過 JC-1染色檢測槲皮素對 o,p’-DDT誘導(dǎo)的 HL-7702細(xì)胞線粒體膜電位的影響；Western印跡檢測線粒體凋亡相關(guān)蛋白的變化

5、。結(jié)果表明， o,p’-DDT可誘導(dǎo)人正常肝細(xì)胞HL-7702凋亡，而槲皮素可拮抗o,p’-DDT誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡，且這種作用是通過調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白產(chǎn)生。
　　第四部分：通過檢測ROS水平,以及抗氧化酶活性，包括超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH），研究槲皮素對o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-7702細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響；通過熒光定量PCR實驗檢測NADPH氧化酶系相關(guān)基因的表達(dá)；West

6、ern印跡檢測細(xì)胞漿和細(xì)胞核中Nrf2的表達(dá)。結(jié)果表明，o,p’-DDT可誘導(dǎo)人正常肝細(xì)胞HL-7702細(xì)胞氧化應(yīng)激。槲皮素通過抑制NADPH氧化酶系相關(guān)基因的表達(dá)，同時誘導(dǎo)Nrf2從細(xì)胞質(zhì)中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，激活抗氧化酶的活性，抑制o,p’-DDT誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激。
　　綜上所述，槲皮素能通過抑制NADPH氧化酶和促進(jìn)Nrf2核轉(zhuǎn)移，激活肝細(xì)胞的抗氧化酶活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平，從而拮抗o,p’-DDT誘導(dǎo)的HL-770