槲皮素對(duì)氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:以C57BL/6小鼠為研究對(duì)象，采用高脂飲食結(jié)合氫醌喂養(yǎng)的方法，模擬干性AMD動(dòng)物造模，觀察槲皮素對(duì)Nrf2/ARE信號(hào)通道及下游抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶調(diào)控作用，闡明槲皮素保護(hù)氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的作用機(jī)制。
　　方法:將C57BL/6小鼠隨機(jī)分組:分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、給藥組;正常對(duì)照組，正常飲食飲水;模型組和給藥組均予高脂飲食+氧化物氫醌飲水造模，造成小鼠視網(wǎng)膜氧化損傷，模擬干性AMD動(dòng)物模型;給藥組，以槲皮素灌胃治

2、療，包括低劑量組100mg/kg/d，中劑量組200mg/kg/d，高劑量組400mg/kg/d;利用透射電鏡掃描，觀察RPE下沉積物厚度和寬度、Bruch膜厚度，評(píng)價(jià)造模情況及槲皮素對(duì)氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護(hù)作用;比色法測(cè)定小鼠血清SOD、GSH-Px、CAT活性和ROS、MDA含量;熒光定量PCR、western blot檢測(cè)槲皮素對(duì)小鼠視網(wǎng)膜Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)。
　　結(jié)果:高脂飲食+氫醌喂養(yǎng)，

3、使小鼠視網(wǎng)膜發(fā)生氧化損傷，小鼠視網(wǎng)膜RPE發(fā)生改變，RPE層下可見(jiàn)大量脂性堆積物，Bruch膜明顯增厚，出現(xiàn)干性AMD的典型眼底改變，成功模擬干性AMD動(dòng)物模型。同正常對(duì)照組相比，模型組SOD、GSH-Px、CAT活性顯著下降，ROS、MDA含量增高;同模型組相比，槲皮素治療組SOD、GSH-Px、CAT活性明顯升高，ROS、MDA含量下降。Western blot結(jié)果顯示:正常對(duì)照組，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的Nrf2蛋白表達(dá)高于細(xì)胞核內(nèi)，模型對(duì)照組

4、，即發(fā)生氧化應(yīng)激時(shí)，細(xì)胞核內(nèi)的Nrf2蛋白表達(dá)高于細(xì)胞質(zhì)，說(shuō)明發(fā)生氧化應(yīng)激時(shí)，Nrf2蛋白從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核;在細(xì)胞質(zhì)中，給藥組Nrf2的表達(dá)高于模型組;在細(xì)胞核中，低中劑量組Nrf2的表達(dá)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，但是無(wú)明顯差異;同正常組相比，HO-1、NQO-1、GCL等Ⅱ相代謝酶的表達(dá)明顯上調(diào)，槲皮素治療組同模型組組比表達(dá)下調(diào)。PCR結(jié)果顯示:同正常對(duì)照組相比，模型組Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL的表達(dá)明顯升高，同模型組相比，給藥組