槲皮素衍生物的合成及其對氧化損傷保護作用的研究.pdf

1、槲皮素（quercetin,3，5,7,3',4'—pentahydroxy flavone）是在植物界中大量存在的一種黃酮類化合物，約有100多種植物含有槲皮素。其具有廣泛的藥理作用和生物活性，如抗氧化和清除氧自由基、降低血壓、保護心肌缺血、避免缺血再灌注損傷、增強免疫功能及抗癌、抗菌、抗病毒及鎮(zhèn)痛作用等，但該化合物含有五個極性較大的羥基基團，親酯性與親水性都較弱，存在強烈的首過效應，生物利用度極低，在臨床治療方面應用局限性強。因此本

2、論文以槲皮素為先導化合物，根據羥基的化學性質差異，對其進行化學修飾，并研究了合成的槲皮素衍生物對人臍靜脈內皮細胞在氧脅迫下的預防與保護作用。
　　 從改善槲皮素的溶解性、阻斷其首過效應出發(fā)，本論文選擇溴乙酸乙酯以及氯乙酸乙酯對槲皮素進行酯化修飾，合成了不同取代數的衍生物。利用相位移催化法進一步合成了三種相對應的羧酸衍生物，并優(yōu)化了其合成的反應條件。以氯乙酸乙酯為反應原料，DMF為溶劑，NaHCO3為縛酸劑，30℃下恒溫攪拌2h得

3、到了槲皮素衍生物Eaq1。以溴乙酸乙酯為反應原料，DMF為溶劑，K2CO3為縛酸劑，30℃下恒溫攪拌3h得到衍生物Eaq3，Eaq4。再以純化后的Eaq1，Eaq2，Eaq4為反應原料，以相位轉移催化法合成了衍生物Aq1，Aq3，Aq4。所有合成的化合物都采用IR，MS，13C NMR進行了結構鑒定與表征。
　　 采用H2O2誘導建立人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)氧化損傷模型。將細胞分為對照組、H2O2損傷組和藥物組。測定了HU

4、VEC的乳酸脫氫酶的釋放率、超氧化物歧化酶、丙二醛(MDA)、NO生成量的變化趨勢;通過MTT、激光共聚焦、評估了正常和氧化損傷HUVEC的存活率、細胞形態(tài);運用高效液相色譜法快速測定藥物分子在細胞內的吸收和代謝，并與槲皮素進行對比。主要結果如下:
　　 1.采用100μmol/L H2O2誘導建立了血管內皮細胞氧化損傷模型，激光共聚焦顯微鏡觀察的結果表明，細胞形態(tài)發(fā)生了明顯改變，產生了凋亡小體。
　　 2.當槲皮素及合

5、成的衍生物終濃度達到150μmol/L時，會抑制內皮細胞的存活，細胞的形態(tài)發(fā)生明顯改變，呈現細胞毒性。
　　 3.槲皮素及合成的衍生物均能修復或者削弱H2O2對血管內皮細胞產生的損傷，能使血管內皮細胞損傷的LDH釋放率降低，增強SOD活力，增大NO的產率，使細胞的清除自由基的能力上升，進而使細胞的脂質代謝產物MDA的含量減少。
　　 4.采用HPLC測定細胞培養(yǎng)液所含槲皮素及其衍生物的濃度。結果表明，隨著與細胞共同孵育時