基于Nrf2信號通道研究芹菜素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護作用.pdf

1、目的:以C57BL/6小鼠為研究對象，研究芹菜素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護作用;通過比較小鼠視網(wǎng)膜氧化損傷程度的差異以及藥物干預(yù)前后Nrf2及相關(guān)下游靶基因酶的研究，探明Nrf2信號通道在干性AMD發(fā)病過程中起的作用以及芹菜素防治干性AMD的作用機制。
　　方法:將C57BL/6小鼠隨機分成五組:正常對照組、模型對照組、給藥組;模型對照組:高脂飲食+氫醌造模，通過造成小鼠視網(wǎng)膜氧化損傷，模擬干出干性AMD的動物模型;給藥組芹菜素的

2、劑量為:芹菜素低劑量組100mg/kg/d，中劑量組200mg/kg/d，高劑量組400mg/kg/d;采取電鏡掃描方式，觀察RPE下沉積物厚度和寬度、Bruch膜厚度，評價造模情況及芹菜素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護作用;利用比色法測定出小鼠血清SOD、GSH-Px、CAT活性和ROS、MDA含量;利用熒光定量PCR、western blot檢測芹菜素對正常動物、模型動物干預(yù)后視網(wǎng)膜Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)。<

3、br>　　結(jié)果:電鏡下觀察實驗小鼠視網(wǎng)膜RPE發(fā)生改變，RPE層下可見大量脂性堆積物，Bruch膜明顯增厚，出現(xiàn)與AMD相類似的典型病理改變，表明造模成功。小鼠經(jīng)過芹菜素哥劑量灌胃后，與模型對照組相比，低、中、高劑量組小鼠血清中總ROS水平均明顯降低（低、中、高劑量組均P＜0.01），血清中MDA含量亦顯著降低（低、中、高劑量組均P＜0.01），濃度越高降低越明顯，呈劑量依賴關(guān)系。說明芹菜素可以降低血清中總ROS和MDA的含量，可以改善

4、模型小鼠視網(wǎng)膜的氧化應(yīng)激狀態(tài)，減少活性氧及各種氧自由基對小鼠視網(wǎng)膜的損傷。WesternBlot結(jié)果顯示，經(jīng)高脂飲食+氫醌造成氧化應(yīng)激后，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的Nrf2蛋白表達(dá)明顯減少，而細(xì)胞核內(nèi)Nrf2蛋白表達(dá)明顯增高，證實了在受到氧化應(yīng)激時，Nrf2會在核內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)移，使自身處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。并且PCR檢測Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL mRNA表達(dá)水平結(jié)果顯示:與正常對照組相比，模型組Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL mRNA表達(dá)

5、水平明顯升高(P＜0.01)，說明高脂飲食+氫醌造模使小鼠機體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，從而激活Nrf2通道，激發(fā)自身釋放Ⅱ相酶發(fā)揮抗氧化作用;經(jīng)芹菜素治療后，與模型對照組相比，給藥組的Nrf2、HO-1、NQO-1、GCLmRNA表達(dá)水平均有所下降，提示這可能與模型組受到氧化刺激后，體內(nèi)產(chǎn)生了強烈的氧化應(yīng)激狀態(tài)，為了是自身處于穩(wěn)定狀態(tài)，保護視網(wǎng)膜免受氧化損傷有關(guān)。
　　結(jié)論:高脂飲食+氫醌喂養(yǎng)，可以成功制造氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜模型，通過觀

6、察RPE的改變、RPE下沉積物及Bruch膜厚度情況，證明該造模方法可以成功模擬干性AMD的動物模型;芹菜素可以提高氧化損傷小鼠血清中抗氧化酶的活性，降低血清總活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)的含量，從而發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用，而且呈現(xiàn)劑量依賴性;芹菜素治療后，與模型對照組相比，給藥組的Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL mRNA表達(dá)水平均有所下降，可能是芹菜素對于模型小鼠體內(nèi)氧化/抗氧化失平衡的狀態(tài)，代償性的減少了Nrf2等蛋白的表