告達庭的抗肝癌作用及機制研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是我國最常見惡性腫瘤之一，由于起病隱匿、早診困難及進展迅速，大于80％的患者就診時已屆中晚期，治療棘手，預(yù)后很差。原發(fā)性肝癌90％為肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）。迄今為止，肝癌的藥物治療還存在諸多未知領(lǐng)域和困難，不懈地探求有效且耐受良好的肝癌治療新藥仍是一項持續(xù)性工作。發(fā)揮中醫(yī)藥的優(yōu)勢，探尋高效的抗肝癌藥物并闡明其抗腫瘤的分子機理，對于提高肝癌療效有著積極的意義。告達庭(caudatin

2、)是從傳統(tǒng)補益類中藥白首烏中提取的一種C21甾體苷元，其具有較強的體內(nèi)外抗腫瘤活性的研究已有部分報道，體外研究表明告達庭對人肝癌細胞株SMMC-7721的生長有明顯的抑制作用，但關(guān)于其抗肝癌作用的詳細機制還需深入研究。本論文通過研究告達庭在體內(nèi)外對肝癌細胞的生物學(xué)功能的影響，進一步觀察了其對肝癌的作用并探討了其作用機制。
　　第一部分理論研究
　　目的:探討肝癌的病因病機和防治方藥特點及規(guī)律，加強中醫(yī)對肝癌的認識，以利于指導(dǎo)

3、臨床治療。方法:研究、整理古代經(jīng)典醫(yī)籍中肝癌相關(guān)病證的論述及近年來中醫(yī)藥防治肝癌的文獻和研究現(xiàn)狀。結(jié)果:古代醫(yī)家對肝癌病因病機的認識主要包括外邪侵襲、飲食不節(jié)、起居不慎、正氣不足、臟腑虧虛、情志所傷等幾個方面;現(xiàn)代醫(yī)家認為肝癌的基本病理特征可概括為虛、毒、瘀、痰、濕、熱;在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中，癌毒、濕熱、痰濁、瘀血、水飲往往膠結(jié)錯雜，互相影響。古今用藥各有側(cè)重，治療應(yīng)注重扶正祛邪，標(biāo)本兼顧。結(jié)論:中醫(yī)藥防治肝癌的思路在于治本責(zé)脾腎，扶

4、正以祛邪;辨病與辨證結(jié)合，分期施治，突出扶正、祛邪之側(cè)重，有的放矢;病機復(fù)雜多重，治宜復(fù)法合方。
　　第二部分告達庭抑制肝癌SMMC-7721細胞生長的體外研究
　　目的:研究告達庭在體外對肝癌細胞生長和轉(zhuǎn)移的影響。方法:MTT比色法檢測告達庭對肝癌細胞SMMC-7721細胞抑制活性;流式細胞術(shù)檢測細胞周期及凋亡率;Western blot檢測β-catenin、GSK3β、MMP-2、MMP-9蛋白表達;qPCR檢測Cyc

5、lin D1、COX-2、MMP-2和MMP-9 mRNA表達;Transwell小室實驗檢測細胞轉(zhuǎn)移率。結(jié)果:體外細胞實驗中告達庭對SMMC-7721細胞具有明顯的抑制其生長的作用，24 h時IC50值為89.49μM，48 h時IC50值為54.43μM，72 h組的IC50值為118.07μM，生長抑制作用呈劑量和時間依賴關(guān)系;流式細胞術(shù)的結(jié)果顯示告達庭可引起腫瘤細胞阻滯于細胞周期進程的G1期，與空白組對照，低、中、高劑量組細胞凋

6、亡率分別提高到10.67％、17.65％、22.52％;β-catenin、GSK3β、MMP-2、MMP-9蛋白和Cyclin D1、COX-2、MMP-2和MMP-9 mRNA表達顯著下降;與空白組對照低、中、高劑量組腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移率分別下降至9.85％、7.71％、7.29％。結(jié)論:體外實驗證明告達庭對人肝癌SMMC-7721細胞有較強的生長抑制作用，可明顯降低肝癌細胞的轉(zhuǎn)移能力，其作用可能與調(diào)控Wnt/β-catenin信號通路

7、有關(guān)。
　　第三部分告達庭抑制肝癌SMMC-7721細胞裸鼠移植瘤的體內(nèi)研究
　　目的:人肝癌細胞皮下移植動物模型觀察告達庭對動物體內(nèi)腫瘤生長的影響。方法:建立裸小鼠皮下異種移植瘤模型，低、高劑量組分別灌胃50、100 mg/kg告達庭，15天后處死，稱體重、瘤重，計算抑制率;免疫組化分析Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)蛋白MMP-2、VEGF、COX-2、β-catenin的變化情況。結(jié)果:告達庭低、高劑量組腫瘤抑制

8、率分別為74.72％(P＜0.01)，60.84％(P＜0.01);與空白組比較低、高劑量組VEGF表達下調(diào)至5.07％、7.10％; MMP-9表達下調(diào)至4.41％、5.38％; COX-2表達下調(diào)至3.01％、6.56％;β-catenin表達下調(diào)至9.02％、11.11％。結(jié)論:告達庭可顯著抑制人肝癌SMMC-7721荷瘤裸鼠腫瘤的生長，降低裸鼠移植瘤內(nèi)β-catenin、MMP-2、VEGF、COX-2的表達。
　　通過本