鱷嘴花抗肝癌有效部位的篩選及機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究鱷嘴花(Clinacanthus nutans，CN)提取物對(duì)荷瘤小鼠的體內(nèi)抑瘤作用，篩選其活性部位，探究鱷嘴花活性部位的抗腫瘤效果及對(duì)荷瘤小鼠生命延長(zhǎng)作用，并初步闡明其可能的作用機(jī)制。
　　方法:將馬來(lái)西亞產(chǎn)的鱷嘴花全草，烘干，乙醇提取得到鱷嘴花粗提物，冷凍干燥得粉末。小鼠Heps肝癌細(xì)胞接種至ICR小鼠右側(cè)腋下，建立小鼠Heps肝癌模型，隨機(jī)分成對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、CN低劑量組(45 mg/kg)、CN中劑量組(90

2、 mg/kg)、CN高劑量組(135 mg/kg)。游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑和寬徑，計(jì)算腫瘤體積。每天觀察小鼠體重變化，攝食量的變化。給藥十一天后頸椎脫臼處死，剝離腫瘤，肝臟，脾臟，胸腺并稱(chēng)重。蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosinstaining，H&E)觀察腫瘤組織形態(tài)。萃取法制備鱷嘴花粗提物不同的極性部位，得到石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位，正丁醇部位和水部位，冷凍干燥。首先對(duì)水部位和正丁醇部位分別進(jìn)行抗腫瘤活性研究

3、，方法同上。H&E染色觀察鱷嘴花正丁醇提取物(Clinacanthus nutans n-butanolextracts，CN-N)對(duì)腫瘤組織的影響。生命延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)觀察CN-N對(duì)荷瘤小鼠生存時(shí)間的影響。TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)檢測(cè)CN-N對(duì)細(xì)胞凋亡情況。WesternBlot檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA，proliferating cell nuclear antigen)，信號(hào)

4、轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子(Signal transducer and activator of transcription，STAT3)的表達(dá)來(lái)檢測(cè)CN-N對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。Western Blot檢測(cè)Caspase-3，PARP(poly ADP-ribose polymerase)的表達(dá)來(lái)檢測(cè)CN-N對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，低劑量組(45 mg/kg)、中劑量組(90 mg/kg)、高劑量組

5、(135 mg/kg)鱷嘴花粗提物對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤率達(dá)分別為35.2％，62.1％，14.5％;鱷嘴花粗提物水部位低劑量組(36 mg/kg)、中劑量組(72 mg/kg)、高劑量組(108mg/kg)對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤率達(dá)分別為19.1％，26.4％，15.6％; CN-N(3 mg/kg)組、CN-N(10 mg/kg)組對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤率達(dá)分別為41.0％，61.7％;鱷嘴花提取物對(duì)荷瘤小鼠體重，免疫器官均無(wú)顯著抑制作用;H&E染色

6、結(jié)果顯示CN-N給藥組腫瘤細(xì)胞凋亡/壞死程度較模型組明顯;生命延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組、CN-N(1 mg/kg)組、CN-N(3 mg/kg)組、CN-N(10 mg/kg)組存活時(shí)間分別為19.9±5.6 d，29.9±7.2 d，21.8±7.1 d,25.4±7.2 d,30.8±10.4 d;CN-N(1 mg/kg)組、CN-N(3 mg/kg)組、CN-N(10 mg/kg)組對(duì)荷瘤小鼠生命延長(zhǎng)率分別為9.5％，

7、27.6％，54.8％; Western Blot結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，CN-N給藥后，PCNA表達(dá)減少，p-STAT3表達(dá)減少，cleaved-caspase-3表達(dá)增加，cleaved-PARP表達(dá)增加。
　　結(jié)論:當(dāng)前結(jié)果表明，鱷嘴花粗提物具有良好的體內(nèi)抗腫瘤活性，以中劑量組(90 mg/kg)效果最佳，抑瘤率達(dá)62.0％，且無(wú)顯著毒副作用。鱷嘴花水部位提取物抑瘤率較低，并沒(méi)有顯示出顯著抗腫瘤效果。鱷嘴花正丁醇部位CN-N提

8、取物顯示出良好抗腫瘤效果，抑瘤率隨著劑量的增加而逐漸增加;CN-N能顯著提高荷瘤小鼠的生存期，生存期隨著給藥劑量的增加而增加。CN-N(10 mg/kg)組抑瘤率為61.7％，生命延長(zhǎng)率為54.8％，而且對(duì)荷瘤小鼠體重和免疫器官無(wú)顯著抑制作用，表明CN-N毒副作用可能較小，顯示出高效低毒的效果。CN-N給藥后，PCNA，p-STAT3表達(dá)減少，cleaved-caspase3，cleaved-PARP表達(dá)增加，表明CN-N可能是通過(guò)抑制