菝葜抗炎有效部位群的活性成分及其作用機(jī)制研究.pdf

1、中藥菝葜，又名金剛藤，為百合科植物菝葜 Smilax china L.的干燥根莖。菝葜作為常用中藥，收載于2015版《中國藥典》，具有祛風(fēng)利濕、解毒散瘀的功效，用于筋骨酸痛，小便淋漓，帶下量多等癥。湖北福人藥業(yè)有限公司以菝葜為原料生產(chǎn)的“金剛藤膠囊”，用于治療盆腔炎、附件炎、包塊及婦科其他疾患，療效顯著，受到廣大患者歡迎。
　　項(xiàng)目組前期的研究結(jié)果表明，皂苷和黃酮類成分是菝葜主要的抗炎有效物質(zhì)部位，但發(fā)揮藥效作用的活性成分并不清楚

2、?；谡n題組對菝葜抗炎有效部位群指紋圖譜和血清藥化的研究結(jié)果，本論文對菝葜抗炎有效部位群的主要入血成分進(jìn)行了抗炎、抗氧化及免疫調(diào)節(jié)活性研究，并對主要活性成分抗炎作用機(jī)制進(jìn)行探討，為詮釋菝葜抗炎作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及遴選活性先導(dǎo)化合物提供了科學(xué)依據(jù)。本論文主要完成了以下研究工作：
　　1.采用DPPH自由基、羥自由基反應(yīng)體系、FRAP法分別測定菝葜有效部位群及落新婦苷、花旗松素、槲皮素、蘆丁、白藜蘆醇、黃杞苷等6個單體成分的自由基清除

3、能力和鐵離子還原能力；建立H2O2誘導(dǎo)大鼠紅細(xì)胞膜損傷模型，孵育后檢測藥物對紅細(xì)胞溶血抑制率和紅細(xì)胞懸液中丙二醛（ MDA）含量、超氧化物歧化酶（ SOD）及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力的影響。結(jié)果顯示，菝葜抗炎有效部位群及其6個單體均具有體外抗氧化作用，并對紅細(xì)胞膜具有保護(hù)作用，推測菝葜抗炎效應(yīng)與其抗氧化特性有關(guān)。
　　2.采用小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫活性篩選模型，探討菝葜有效部位群及其含有的花旗松素、白藜蘆醇、甲基原薯蕷皂

4、苷等12個單體成分的免疫調(diào)節(jié)作用。采用 CCK-8法測定細(xì)胞的增殖率，Elisa法測定細(xì)胞中 IL-2、TNF-α、IFN-γ三種細(xì)胞因子的分泌量。結(jié)果表明，這些藥物均具有免疫活性，其中菝葜有效部位群作用最強(qiáng)，體現(xiàn)了中藥多成分的協(xié)同作用。
　　3.構(gòu)建以COX-1和COX-2分子靶標(biāo)為主的基于THP-1細(xì)胞的體外抗炎篩選模型，將菝葜有效部位群及其12個單體成分作用于THP-1細(xì)胞后，探討藥物對COX-2的選擇性抑制作用。結(jié)果表明，

5、這些藥物對COX-2的抑制作用均有一定的選擇性，而菝葜有效部位群、花旗松素和落新婦苷對COX-2抑制作用最顯著。
　　4.采用LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞模型，探討菝葜有效部位群、花旗松素及落新婦苷對相關(guān)促炎細(xì)胞因子生成及基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，三種物質(zhì)均能顯著的抑制IL-1β、IL-6和TNF-α的生成并能有效降低其mRNA的表達(dá)。由此推測，菝葜活性成分發(fā)揮抗炎作用的一條途徑是抑制細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β、IL-6和TNF-α等促炎因子