壁虎醇提物抗肝癌作用及機制研究.pdf

1、研究背景：
　　肝癌是目前發(fā)病率和死亡率均高的常見惡性腫瘤之一，嚴重威脅人們的健康與生命，五年生存率不足5％。其發(fā)生發(fā)展是由多基因參與、多步驟協(xié)同的復(fù)雜過程。肝癌組織中豐富的血管特性是其易于發(fā)生肝內(nèi)播散和遠處轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除率低、術(shù)后復(fù)發(fā)率高和預(yù)后差的重要原因。肝癌的治療主要有手術(shù)、放療、化療和生物治療。傳統(tǒng)的放化療副作用大、非特異性，對腫瘤和正常組織均有損害。當前抗癌藥傾向于個體化化療和分子靶向治療，腫瘤靶向治療成為很有發(fā)展前景日

2、益重要的策略，但是臨床嚴重副作用或價格昂貴而使用受限。尋找和發(fā)現(xiàn)高效低毒、經(jīng)濟實用、安全的、新的抗肝癌藥物迫在眉睫。用分子生物化學(xué)方法分離、鑒定中藥新的有效成分、研究其作用機制，為創(chuàng)新藥物開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　本課題組的前期研究顯示壁虎及壁虎醇提物均對體內(nèi)小鼠S180肉瘤具有顯著的抑制作用、增效減毒作用，體外對人食管癌細胞有抑制生長、上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白 Bax/Bcl-2比值、升高 Fas和 Caspase-3蛋白的表達，抑制腫瘤

3、血管的生成，誘導(dǎo)凋亡作用。
　　目的：
　　研究體外壁虎醇提物對人肝癌HepG2細胞的增殖抑制情況及其可能機制，壁虎醇提物對氯化鈷(CoCl2)誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)肝癌細胞HepG2中缺氧誘導(dǎo)因子-1a(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)表達的影響；體內(nèi)壁虎醇提物對荷瘤小鼠H22肝癌抗癌效應(yīng)及其免疫調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　　通過MTT法檢測不同濃度壁虎醇提物（0.125,0.25,

4、0.5,1.0,2.0,4.0,8.0mg/ml）體外作用人肝癌 HepG2細胞后的增殖抑制情況，用200μmol/lCoCl2處理人肝癌 HepG2細胞建立細胞缺氧模型后，SP免疫組化法檢測缺氧誘導(dǎo)因子的表達變化；Hoechst33258熒光染色觀察細胞凋亡細胞形態(tài)變化；采用小鼠H22肝癌移植模型，觀察壁虎醇提物高、中、低劑量（0.40、0.80、1.60g/kg）對腫瘤生長的抑制,免疫器官胸腺、脾臟指數(shù)的影響，外周血白細胞計數(shù)和 E

5、LISA試劑盒測荷瘤小鼠血清中IL-12，IL-18含量。
　　統(tǒng)計學(xué)處理
　　應(yīng)用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料結(jié)果以均數(shù)±標準差( x±s)表示，配對數(shù)據(jù)采用 t檢驗，組間數(shù)據(jù)采用單因素方差分析(ANOVA)，用SNK(Student-Newman-Keuls)檢驗，以α=0.05為檢驗水準，P<0.05為差異顯著， P<0.01差異非常顯著。
　　結(jié)果：
　　1.壁虎醇提物不同濃度均能不

6、同程度的抑制人肝癌 HepG2細胞生長，其抑制作用呈現(xiàn)明顯的劑量依賴和時間依賴性(P<0.01)。
　　2.Hoechst33258熒光染色觀察發(fā)現(xiàn)正常細胞核圓或橢圓型，呈均勻藍色，用壁虎醇提物處理后的人肝癌 HepG2細胞變圓細胞核固縮，有些呈致密強熒光，可見凋亡小體，說明壁虎醇體物能誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡。
　　3. SP免疫組化法檢測用CoCl2處理人肝癌HepG2細胞，在缺氧條件下，缺氧誘導(dǎo)因子高表達，而常氧條件下低表達，

7、壁虎醇提物能下調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子的表達。
　　4.壁虎醇提物高中低劑量組均對H22荷瘤小鼠均具有明顯的抑制作用，抑制率分別為55.25%，47.89%，15.16%，與模型組、阿霉素組相比差異顯著。高中低劑量的荷瘤小鼠脾臟、胸腺質(zhì)量及其指數(shù)、外周血白細胞計數(shù)，血清中IL-12，IL-18含量同模型組及阿霉素組相比差異均非常顯著。
　　結(jié)論：
　　1.壁虎醇提物體內(nèi)外有明顯抑制肝癌細胞增殖、促進肝癌細胞凋亡的作用，并呈劑量時